جداسازی،آنالیز مولکولی و ایجاد جهش نقطه ای در ژن EPSPSباکتریایی به منظور ایجاد مقاومت به علفکش گلایفوسیت در گیاه کلزا (Brassica napus)

یکی از موثرترین راه های ایجاد گیاهان مقاوم به علفکش گلایفوسیت، دستورزی ژن کد کننده آنزیم epsps، به منظور کاهش میل ترکیبی گلایفوسیت به این آنزیم می باشد. در این تحقیق یکی از کلیدی ترین نقاط اتصال آنزیم epsps که اسید آمینه گلایسین شماره 96 است، مورد توجه قرار گرفت. با ایجاد یک جهش نقطه ای به روش طراحی پرایمر ویژه و واکنش pcr، کد ژنتیکی اسید آمینه فوق به اسید آمینه آلانین تبدیل گردید. ژن دست ورزی شده، در داخل پلاسمیدهای کلونینگ 18puc و بیانی گیاه pb121 حامل ژن مورد نظر ، از طریق باکتری agrobacterium tumefaciens سویه 4404 lba به گیاه کلزا رقم - 7045- pf 91 منتقل گردید. از انتهای بریده شده دنباله کوتیلدون، به عنوان بافت هدف جهت انتقال ژن استفاده گردید. برای ارزیابی اولیه تراریختی گیاه از مقاومت گیاهان به کانامایسین استفاده شد. نتایج این تحقیق نشان داد که درصد باززایی نوساقه و درصد تراریختی گیاهچه به ترتیب 73 و 30 درصد بود. آنالیزهای مولکولی وارزیابی مقاومت به این علف کش در دست انجام است.