توسعه و معتبرسازی روش استخراج داروی آپیکسابان از خون و آنالیز آن با روش کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا

سابقه و هدف: آپیکسابان جز دارو های ضد انعقادی خوراکی و مهار کننده مستقیم فاکتور 10 است که جهت کاهش خطر چندین بیماری ترومبوآمبولیک استفاده می شود. با اندازه گیری ماده موثره دارو در خون می توان به اثربخشی آن در مقایسه با داروی مرجع پی برد. در این مطالعه، یک روش سریع، جدید و معتبر بر پایه کروماتوگرافی مایع فاز معکوس برای اندازه گیری آپیکسابان در پلاسمای انسانی، توسعه یافته است. روش بررسی: ابتدا شرایط کروماتوگرافی بهینه‌سازی شد. سپس، اعتبارسنجی روش با استفاده از نمونه‌های استاندارد اسپایک شده صورت گرفت. برای ارزیابی روش استخراج آپیکسابان از نمونه‌های خون اسپایک شده، درصد بازیابی آپیکسابان محاسبه شد.  یافته ها: بررسی آپیکسابان با ستون(250 mm × 6.4 mm, 5μ)   c18  و روش ایزوکراتیک با فاز متحرک شامل استونیتریل: بافر آمونیوم استات 0.15 درصد با ph 0.05 ± 7.6 به نسبت حجمی 50:50 و سرعت جریان 1 میلی لیتر در دقیقه در دمای اتاق، انجام شد. آپیکسابان در طول موج 276 نانومتر شناسایی شد. منحنی کالیبراسیون آپیکسابان در پلاسمای انسانی در محدوده ی 0.3 تا 0.12288 میکروگرم در میلی لیتر با ضریب همبستگی r^2  = 9957.0 خطی بود و حداقل غلظت قابل اندازه گیری و تشخیص به ترتیب 0.06 و 0.02 میکروگرم بر میلی لیتر و میانگین درصد بازیابی روش استخراج دارو از خون 78.73 درصد به دست آمد.نتیجه گیری: روش hplc-uv توسعه یافته در این مطالعه، برای تعیین دقیق سطوح آپیکسابان در مطالعات فارماکوکینتیک مناسب است.

analytical method development and validation for extraction and quantification of apixaban in human plasma using hplc

background: apixaban, an oral anticoagulant and direct factor xa inhibitor, is used to reduce the risk of various thromboembolic diseases. measuring the active substance in blood can assess its effectiveness compared to the reference drug. in this study, a rapid, new, and reliable reversed-phase liquid chromatography method was developed for measuring apixaban in human plasma. materials and methods: the chromatographic conditions were optimized, followed by validation using spiked standard samples. to evaluate the extraction method of apixaban from spiked blood samples, the recovery rate was calculated. results: the chromatographic analysis was conducted on a c18 column (250 mm × 4.6 mm, 5μ) using isocratic elution with a mobile phase consisting of a mixture of acetonitrile: ammonium acetate buffer 0.15% at ph 7.6 ± 0.05 with a 50:50 volume ratio and a flow rate of 1 ml/min at room temperature. apixaban detection was carried out at 276 nm. the calibration curve for apixaban in human plasma was linear in the range of 0.3 to 0.12288 µg/ml with a correlation coefficient of r2 = 0.9957. limit of quantitation and limit of detection concentrations were obtained as 0.06 and 0.02 µg/ml, respectively and the average extraction recovery of the extraction method was 78.73%.conclusion: the developed and validated hplc-uv method presented in the study is suitable for accurate determination of apixaban levels in the pharmacokinetic studies.