ژنوتایپینگ rs61753984(r34x) و rs62643623(q218x) در بیماران فون ویلبراند تیپ3 با تکنیک تترا ارمز پی سی ار

سابقه و هدف: بیماری فون ویلبراند شایع ترین اختلال خونریزی دهنده ارثی در جهان است. اندازه بزرگ ژن همراه با تنوع واریانت های پاتوژن عامل بیماری، تعیین ماهیت دقیق ژنتیکی آن را دشوار نموده است. برخی جهش های بی معنی در این بیماری از شیوع بالاتری برخوردارند و می توان بررسی آنها را به عنوان گام اول در تعیین عامل ژنتیکی بیماری، در نظر گرفت. روش بررسی: در این مطالعه 44 بیمار غیر وابسته مبتلا به فون ویلبراند تیپ 3 بررسی شدند. برای تعیین جهش های نقطه ای rs61753984 and rs62643623، از تکنیک pcr tetra arms استفاده شد. سپس تکنیک arms-pcr با همان پرایمرها انجام و نهایتا در موارد موتانت، تایید با تکنیک توالی یابیsanger انجام شد. یافته ها: در ژنوتایپینگ rs61753984، دو بیمار باندهای 248bp و 181bp نشان دادند که موید ژنوتایپ هوموزیگوت موتانت است. در سایر موارد باندهای 248bp 121bp دیده شد. در ژنوتایپینگ rs62643623، یک بیمار باندهای 378bp و 260bp نشان داد که موید ژنوتایپ هوموزیگوت موتانت است. در سایر موارد باندهای 378bp 168bp دیده شد. نتایج تست arms-pcr مشابه tetra arms-pcr بود. نهایتا نتایج با تعیین توالی sanger تایید شد.نتیجه گیری: برخی جهش های نقطه ای از جمله جهش های نقاط داغ آرژینین، در بیماری فون ویلبراند از شیوع بیشتری برخوردارند. در اغلب مطالعات، برای بررسی این واریانت ها از تکنیک pcr-rflp استفاده شده است. در مطالعه حاضر برای این واریانتها، تکنیک tetra arms-pcr بکار رفت. و به عنوان تکنیکی آسان، مقرون به صرفه و قابل اعتماد پیشنهاد شد. در مواردی که این واریانت ها شایع به عنوان عامل بیماری تعیین نشود، روش های پیشرفته مولکولی باید به کار گرفته شوند.

genotyping rs61753984 (r34x) and rs62643623 (q218x) in von willebrand disease patients by tetra arms-pcr

background: von willebrand disease (vwd) is the most common inherited bleeding disorder around the world. large size of the gene and heterogeneous nature of its mutations, make it difficult to determine the exact nature of mutations in vwd. some missense mutations are common in vwd and can be assessed as first step of determining the genetic cause of the disease. materials and methods: forty four unrelated patients categorized as vwd type 3 were included in study. tetra arms-pcr was applied to determine the presence of the point mutations rs61753984 and rs62643623. then arms-pcr was performed with the same primers. in cases with mutant patterns, sanger sequencing was used for conformation of results. results: two patients showed two bands of 248bp and 181bp in rs61753984 (r34x), which corresponds to homozygous mutant genotype. in other patients, homozygous pattern with 248bp and121bp bands was observed. in rs62643623 (q218x) position, one patient with two bands of 378bp and 260bp showed homozygous mutant genotype while other patients showed homozygous wild genotype (378bp and 168bp bands). the results of arms-pcr was the same as tetra arms-pcr. finally, the results of tetra arms-pcr were confirmed by sanger sequencing.conclusion: in present study we used tetra arms-pcr for detection of point mutations, while in most studies pcr-pflp has been used. we found that tetra arms-pcr can be used as a simple, cost effective and reliable method. if these mutations are not found, advanced molecular methods such as sequencing should be applied.