مقایسه تاثیر کشت همجوار لاکتوباسیلوس کازئی و عصاره سلولی آن بر میزان بیان ژن بتادفنسین 2 انسانی در سلول های Ht29

اهداف: دفنسین ها پپتیدهای کاتیونی ضدمیکروبی غنی از سیستئین هستند و bax یک ژن پروآپوپتوزی بوده که منجر به مرگ سلولی می شود. هدف از این مطالعه، بررسی تاثیرکشت و عصاره باکتری لاکتوباسیلیوس کازئی بر میزان بیان ژن بتادفنسین 2 انسانی و bax در سلول های ht29 بود.مواد و روش ها: مطالعه حاضر در مرکز تحقیقات ریزفناوری دارویی علوم پزشکی تبریز، در سال 1396 انجام شده است. در این مطالعه تجربی، رده سلولی ht29 از بانک سلولی پاستور تهیه شد و سلول ها پس از کشت با استفاده از روش mtt assay مورد بررسی قرار گرفتند. استخراج dna از سلول های تیمار شده انجام و تست dna ladder assay صورت گرفت و پس از تهیه cdna ، میزان بیان ژن های bax و بتادفنسین 2 در رده سلولی ht29 به روش realtime pcr مورد سنجش قرار گرفت.یافته ها: نتایج حاصل از آزمایش mtt نشان می دهد باکتری های لاکتوباسیلوس کازئی تکثیر سلول های ht29 را مهار می کنند و سبب القای آپوپتوز در این سلول ها می شوند نتایج دپی و dna ladder assay حاصل از تیمار سلول های ht29 با باکتری لاکتوباسیلوس کازئی تغییرات کیفی آپوپتوز سلولی را نشان داد و نتایج realtime pcr نشان داد که باکتری های لاکتوباسیلوس کازئی سبب افزایش بیان ژن بتادفنسین و در بازه زمانی 12 الی 24 ساعت در سلول های سرطانی کولون ht29می شود و رابطه معنی داری پیدا می کند (023/p=0). نتایج حاصل نشان داد بیان ژن bax در 24 ساعت اول تغییر معنی داری پیدا نمی کند (37/p=0)نتیجه گیری: می توان از عصاره باکتری لاکتوباسیل در جهت تحریک سلول های سرطان برای تولید بتادفنسین، مهار پاتوژن ها، عدم تحریک سیگنالینگ های سلولی و مبارزه با باکتری های مقاوم به آنتی بیوتیک استفاده کرد.

Effect of the Cellular Extract of Co-cultured Lactobacillus Casei on BAX and Human β-Defensin 2 Genes Expression in HT29 Cells

Aims: Defensins are cysteinerich antimicrobial cationic peptides and BAX is a proapoptotic gene that can cause cell death. This study aimed to investigate the effect of cellular extract of cocultured Lactobacillus casei on the expression of BAX and human beta;defensin 2 (hBD2) genes in HT29 cells.Methods Materials: This experimental study was conducted in the Research Center for Pharmaceutical Nanotechnology of Tabriz University of Medical Sciences in 2017. The HT29 cell line was obtained from the Pasteur Institute of Iran, and cells were assessed using Microculture Tetrazolium Test (MTT) after culturing. DNA was extracted from the treated cells, and then the DNA ladder assay was carried out. After preparing cDNA, the expression levels of BAX and hBD2 genes in the HT29 cell line were measured using a realtime Polymerase Chain Reaction (PCR) method.Findings: The results of the MTT assay indicated that Lactobacillus casei inhibited the proliferation of HT29 cells and induced apoptosis in these cells. Results of DAPI staining and DNA ladder assay obtained from treating HT29 cells by Lactobacillus casei showed qualitative changes in cell apoptosis. Moreover, realtime PCR results indicated that Lactobacillus casei bacteria significantly increased the expression of the hBD2 gene in HT29 colon cancer cells within 1224 hours (P= 0.023), while BAX gene expression showed no significant change in the first 24 hours (P= 0.37).Conclusion: The extract of Lactobacillus casei can be used to stimulate cancer cells to produce beta;defensins, inhibit pathogens, prevent the stimulation of cellular signaling, and fight antibioticresistant bacteria.