ایجاد پلاک توسط سویه v4ویروس عامل بیماری نیوکاسل بر روی کشت سلولی و بررسی مولکولی با روش واکنش زنجیره پلیمراز نسخه‌برداری معکوس rt-pcr))

امروزه در بسیاری از کشورهای دنیا واکسن کلون شده مورد استفاده قرار می‌گیرد. جهت کلون کردن یک ویروس، یکی از راه‌ها رشد ویروس بر روی کشت سلول و جدا کردن پلاک‌های مجزا و متفاوت و بررسی آنها از لحاظ مورفولوژی و ژنتیکی است. دراین تحقیق، ابتدا سلول‌های ) madin-darby canine kidney mdck) بصورت تک لایه و بطور استاندارد کشت داده شد. رقت های مختلف ویروس به سلول‌های تک لایه mdck همراه با تریپسین، آگار و سولفات منبزیوم اضافه شد. ویروس توانست بر روی سلول‌های فوق تکثیر و ایجاد اثر سایتوپاتیک (cpe) و پلاک نماید. در رقت 6-10 تعداد 6 پلاک که از لحاظ شکل و اندازه تفاوت داشتند برداشته شدند و جهت تکثیر به تخم‌مرغ جنین دار 11-9 روزه تلقیح گردید. بعد از 48 ساعت مایع آلانتوییک هر تخم‌مرغ حاوی پلاک برداشت ونسبت به جداسازی rna هر پلاک اقدام گردید. منطقه شکست (cleavage site)پروتیین ادغامی(fusion) با تست rt-pcr انجام شد و محصول pcr خالص‌سازی وسکانس گردید. سکانس نوکلیوتیدها و آمینواسیدها برای هر پلاک با سوش های ثبت شده در بانک ژنی مقایسه شد. سکانس نوکلیوتیدهای تمامی پلاک‌های بدست آمده، 97 تا 99% همخوانی با ویروس v4در بانک ژنی را تایید نمود. هدف از این پژوهش ایجاد پلاک از سوش v4 ویروس نیوکاسل بر روی سلول‌های mdck جهت ایجاد پلاک‌های مجزا و در نهایت بررسی مولکولی پلاک‌های ایجاد شده می‌باشد.