تعیین هویت مولکولی آسپرژیلوس پارازیتیکوس و فلاووس در نمونه‌های علوفه با روش duplex pcr و مقایسه با روش‌های کشت و مستقیم

آسپرژیلوزیس بیماری عفونی انسان و طیور است که موجب مشکلات عدیده در آنها می‌شود. هدف اصلی این مطالعه، ارزشیابی دو روش آزمایشگاهی (سنتی و مولکولی) در تشخیص آسپرژیلوس فلاوس و پارازیتیکوس و مقایسه این دو روش می باشد. بعد از استخراج dnaهای سوش‌های استاندارد آسپرژیلوس پارازیتیکوس و فلاووس به همراه پرایمرهای هر قارچ و تست pcr، ژن‌های هر قارچ تکثیر و محصول pcrبه روش ta cloning با استفاده از پلاسمید ptz57r کلون گردید پس از بهینه‌سازی تست‌‌های pcr و pcr duplex 50 نمونه به روش pcr duplex، کشت و آزمایش مستقیم آزمایش شدند. در تست اپتیمایز شده pcr، محصول bp 343 و bp 413 آسپرژیلوس پارازیتیکوس و فلاووس به ترتیب تکثیر گردید. 50 نمونه علوفه به روش duplex pcr ، کشت و آزمایش مستقیم آزمایش شدند. در آزمایش duplex pcr ، کشت و آزمایش مستقیم بر روی نمونه‌ها، 13 نمونه با duplex pcr و 15 نمونه با آزمایش مستقیم و کشت مثبت شد و 26 نمونه با هر دوروش منفی بودند. نتایج بدست آمده از آزمایشات فوق توسط آزمون macnemar بین نتیجه مستقیم و کشت از یک سو و نتیجه duplex pcr از سوی دیگر انجام شده توافق بین دو تست می‌باشد p=0.824. طبق نتایج بدست آمده از نظر تشخیص، تفاوت معنی داری بین دوروش آزمایشگاهی وجود نداشت هرچند روش duplex pcr پاسخ‌دهی سریعتری نسبت به روش‌های سنتی داشت و قادر به تشخیص آسپرژیلوسپارازیتیکوس در نمونه‌ها شد.