کلونینگ ژن 40P مایکوپلاسما آگالاکتیه در سیستم پروکاریوتی

ژن40p کد کننده پروتیین چسبندگی مایکوپلاسما است، که باعث اتصال مایکوپلاسما آگالاکتیه به سلول‌های یوکاریوتی، کلونیزه شدن آن در میزبان و شروع بیماری می‌شود. لیپوپروتیین 40p یک آنتیژن تحریک کننده ایمنی و کاندید مناسب برای واکسن‌سازی است. هدف از انجام این مطالعه تولید واکسن نوترکیب زیرواحدی با استفاده از کلونینگ ژن 40p در سیستم پروکاریوتی میباشد. در این تحقیق، ژن 40p از سه سویه واکسینال مایکوپلاسما آگالاکتیه در ایران تکثیر و تعیین توالی شد. توالی ژن 40p منتخب، پس از یک سری تغییرات، سنتز و در پلاسمید کلونینگ کلون شد، سپس به باکتری اشریشیاکلی به روش شوک حرارتی انتقال داده شد. پس از تکثیر، ژن 40p توسط دو آنزیم برش داده شد. ژن تخلیص شده در پلاسمید بیانی، جهت انتقال به باکتری بیانی کلون شد.نتایج نشان داد که قطعه 920 نوکلیوتیدی ژن 40p از سه سویه واکسینال تکثیر شد که نشانه حضور ژن در آنها می‌باشد. توالی کامل این ژن که شامل 1092 نوکلیوتید بود از پلاسمید کلونینگ جدا و در پلاسمید بیانی pet22b+ حاوی شروع کننده و تمام کننده t7 کلون شد. در نهایت پلاسمید نوترکیب در سلول باکتری ترانسفورم شد. کلونینگ ژن 40p اولین قدم در تولید واکسن زیر‌‌‌واحدی نوترکیب برای پیشگیری از آگالاکسی دردام می‌باشد.