تشخیص و شناسایی گونه‌های کریپتوسپوریدیوم با استفاده از روش‌های nested pcr (nested polymerase chain reaction) و (rflp) restriction fragment length polymorphism در گوساله‌های شهرستان شاهرود

گونه های کریپتوسپوریدیوم به شاخه اپی کمپلکس ها تعلق دارد و پروتوزواهای فرصت طلبی هستند که سیستم های تنفسی و گوارشی در انسان و حیوان ها را آلوده می کند. این مطالعه به منظور بررسی شیوع، تشخیص و شناسایی گونه های کریپتوسپوریدیوم با استفاده از روش های nested pcr و (rflp) restriction fragment length polymorphism در گوساله های شهرستان شاهرود انجام شد. 256 نمونه ی مدفوع از گوساله های زیر 2 ماه جمع آوری شد و نمونه های مثبت با استفاده از روش زیلنلسون رنگ آمیزی شدند. پرایمرهای اختصاصی برای بررسی nested pcr استفاده شد و زیرگونه ها توسط روش rflp بررسی شدند. نتایج مطالعه میکروسکوپی نشان داد که 27 نمونه (54/10 %) از نمونه های مورد بررسی مثبت بودند. نتایج برای روش nested pcr نشان داد که از مجموع نمونه های مورد بررسی، به ترتیب 59/92 % و 41/7 % به ترتیب برای کریپتوسپوریدیوم پارووم و کریپتوسپوریدیوم اندرسونی مثبت بودند. نتایج نشان داد که 25 نمونه تحت تاثیر آنزیم vsp در نواحی 104 و 628 جفت باز قرار گرفتند، که نشان دهنده ی که تایید کننده ی زیرگونه های کریپتوسپوریدیوم پارووم گاوی و زیرگونه ی ژن a بودند. نمونه های تحت تاثیر آنزیم ssp i قرار گرفتند و نتایج باندهایی را در 385 و 448 جفت باز نشان داد که نشان دهنده ی زیر گونه های c. muris/c. andersoni بودند. نتایج توسط آنزیم dde، باندهایی را در 156، 186 و 224 جفت باز نشان داد که نشان دهنده ی زیر گونه ی c. muris بود. گونه ها و زیرگونه های مختلف با استفاده از روش های مختلف شناسایی شدند که می تواند به کنترل کریپتوسپوریدیوز کمک کند.

The detection, and identification of Cryptosporidium species by nested polymerase chain reaction (nested-PCR) and restriction fragment length polymorphism (RFLP) of calves in Shahroud town

Cryptosporidium species belong to Apicomplexa phylum and are opportunistic protozoans that infect the gastrointestinal and respiratory systems of some animals and humans. This study was conducted to investigate the prevalence, detection, and identification of Cryptosporidium species by nested PCR and restriction fragment length polymorphism (RFLP) in calves in Shahroud town.  A total number of 256 calves was collected from fecal samples of preweaned calves (≤2 months) in Shahroud town, and positive samples were stained by ZiehlNeelsen (ZN) staining method. Specific primers were used to investigate the NestedPCR and subspecies were investigated by RFLP method. The microscopic results showed that 27 samples (10.54 %) of the samples were positive. The results for nestedPCR showed that out of samples, 92.59 % and 7.41 % of samples were positive for C. parvum and C. Andersoi, respectively. The results showed that 25 samples were affected by VSP enzyme in regions of 104 and 628 bp that belong C. parvum bovine, and genotype A gene subspecies. The samples were affected by Ssp I enzyme and the results showed bands in regions of 385 and 448 bp that show C. muris/C. andersoni subspecies. The results for dde enzyme showed bands in regions of 156, 186, and 224 bp that confirm C. muris subspecie. The different species and subspecies were identified by different methods and can help to control of the cryptosporidiosis.