طراحی کیت دات الایزا در جهت تشخیص آنتروتوکسین های (sea) باکتری استافیلوکوکوس اورئوس و مقایسه آن با روش ساندویچ الایزا، تعیین صحت تشخیص آن در نمونه نان‌های خامه‌ایی

در این مطالعه تشخیص و شناسایی آنتروتوکسین استافیلوکوکوس اورئوس به کمک طراحی کیت حساس dot elisa انجام شده است. در این مطالعه از کاغذهای نیتروسلولزی با منافذ 22/0 میکرون به‌عنوان بستر استفاده شده است، بر روی بستر یاد شده آنتی‌بادی اختصاصی آنتروتوکسین استافیلوکوکوس اورئوس با رقت500/1 کوت گردیده و سپس توکسین اختصاصی به آنتی‌بادی‌های چسبیده شده مجاورت داده شده است؛ در ادامه آنتی‌بادی نشان‌دار شده با آنزیم hrp با رقت 2000/1 اضافه گردیده، باگذشت زمان و شستشوی مجدد، سوبسترا اضافه شد؛ در این آزمایش نمونه‌ها به‌صورت دستی آلوده شده و سپس با روش ساندویچ الایزا به‌ عنوان استاندارد  طلایی مورد مقایسه قرار گرفت، این کیت قادر به تشخیص 50 نانوگرم بر میلی‌لیتر به بالا توکسین a بوده  و چنانچه میزان توکسین کمتر از این مقدار باشد آن را به‌صورت منفی گزارش کرده، در این آزمایش از 40 نمونه جمع‌آوری‌شده، 4 نمونه مثبت گزارش‌شده، نشان می‌دهد که حدود 10 % نمونه‌های جمع‌آوری‌شده آلوده بوده است؛ امروزه با استفاده از کیت الایزا دات به‌عنوان روش سریع با حساسیت و ویژگی نسبی، می‌توان تکرارپذیری جهت تشخیص آنتروتوکسین a استافیلوکوکوس در نان‌های خامه‌ایی را بهبود بخشید.

Designing Dot ELISA kit for detection of Staphylococcus aureus SEA enterotoxin and Sandwich ELISA compare, its validation in pastry cream bread

In this study, detection and recognition of Staphylococcus aureus enterotoxin was performed by designing a Dot ELISA sensitive kit. In the present study, nitrocellulose membrane (NCM) with 0.22 micron pores was applied as the bed, and 1:500 diluted specific antibody of Staphylococcus aureus enterotoxin was coated on the NCM. Next, The HRPtagged antibody was added with dilution of 1/2000, and the substrate was added gradually and rewashed. In this experiment, the samples were manually contaminated and then compared with the ELISA sandwich method as a gold standard. The kit is capable of detecting 50 ng/ml and higher of toxin A, and if the amount of toxin is less, it will report it negatively. In this test, of which 40 samples were collected and 4 positive cases were reported, it was revealed that about 10% of the collected samples were contaminated. Nowadays, using the Dot ELISA kit as a quick method with relative sensitivity and properties, it is possible to improve the repeatability of detecting Staphylococcus enterotoxin A in creamy candies.