ثبت و شناسایی ژن های توکسیک s.aureus جدا شده از ماهی تیلاپیا با تکنیک multi plex pcr

مقدمه: آبزیان به دلیل کالری و پروتئین بالا و همچنین وجود چربی غیراشباع امگا 3 از اهمیت بسزایی در سبد غذایی برخوردارند. در مراحل مختلف از زمان صید تا رسیدن به دست مصرف‌کننده، همواره ممکن است بسیاری از آبزیان از جمله ماهی به برخی از میکروارگانیسم‌های بیماری‌زا آلوده شوند و در نهایت مسمومیت شدید را برای افراد ایجاد نمایند. در پژوهش حاضر به بررسی ثبت و شناسایی ژن‌های توکسیک استافیلوکوکوس اورئوس جدا شده از ماهی تیلاپیا با تکنیک multi plex pcr پرداخته شده است.مواد و روش‌ها: تعداد کل نمونه‌ها 42 عدد (21 عدد نمونه ماهی تازه و 21 عدد نمونه ماهی منجمد) مدنظر قرار گرفته شد. ابتدا پس از آماده‌سازی نمونه‌های مورد بررسی به ترتیب استافیلوکوکوس اورئوس جدا شد و به صورت کشت سطحی در محیط برد پارکر مورد بررسی قرار گرفت، سپس تست کوآگولاز انجام شد و در مرحله بعد با استخراج dna ژن انتروتوکسیک شناسایی شد. در نهایت توالی‌یابی ژن به صورت اتوماتیک و دستگاهی انجام گرفت.یافته‌ها: یافته‌های به دست آمده نشان داد، 92.9 درصد از کل نمونه‌های مورد بررسی (21 عدد ماهی تیلاپیا تازه و 18 عدد ماهی منجمد) فاقد باکتری استافیلوکوکوس اورئوس بودند و 7.1 درصد از کل نمونه‌ها آلوده به باکتری استافیلوکوکوس اورئوس شدند. نتایج بررسی تست کوآگولاز نیز نشان داد، هر سه نمونه ماهی منجمد مورد بررسی، کوآگولاز مثبت بودند. پس از بررسی ژن‌های تولید‌کننده انتروتوکسیک (sea، seb، sec، sed، see و seg) در بین سه نمونه منجمد آلوده به باکتری استافیلوکوکوس مشاهده شد که تنها در یک نمونه‌ منجمد، ژن انتروتوکسیک sea وجود داشت.نتیجه گیری: نتایج نشان داد با توجه به هزینه کم و زمان بسیار کوتاه‌تر مورد نیاز برای شناسایی ژن های استافیلوکوکوس اورئوس با روش multiplex pcr، این روش ابزار قدرتمندی برای مطالعه ژنوتیپ‌های جدایه‌های استافیلوکوک می‌باشد. بنابراین با استفاده از این روش می‌توان به ارتقا سطح سلامت غذایی در جامعه به خوبی پرداخت.

registration and identification of toxic s. aureus genes isolated from tilapia fish using multiplex pcr technique

introduction: aquatic animal products are considered very important food items in the food basket regarding their high calorie, protein, and omega-3 unsaturated fat. many aquatic animals, including fish, may always be infected with pathogenic microorganisms at various stages, from hunting to purchasing. eventually, these factors would cause severe poisoning in humans. the present study investigates the registration and identification of staphylococcus aureus’s toxic genes isolated from tilapia using the multiplex pcr technique.materials and methods: the sample size included 42 subjects (21 fresh fish samples and 21 frozen fish samples). first, after preparing the samples, staphylococcus aureus was isolated and examined as surface culture in baird-parker medium. next, a coagulase test was performed, and the enterotoxin gene was identified by dna extraction. finally, gene sequencing was carried out automatically and systematically.results: the results suggested that 92.9% of the total samples (21 fresh tilapia and 18 frozen fish) had no staphylococcus aureus, and 7.1% of the samples were infected with staphylococcus aureus. the coagulase test results also suggested that all three frozen fish samples were coagulase positive. examining enterotoxin-producing genes (sea, seb, sec, sed, see, and seg) among three frozen samples infected with staphylococcus bacteria revealed sea enterotoxin gene only in one frozen sample. conclusion: the results showed that due to the low cost and much shorter time required to identify toxic staphylococcus aureus genes using multiplex pcr, this method is highly effective in studying the genotypes of staphylococcus isolates. therefore, by using this method, one can improve the food health level in the society.