بیان اپیتوپ g1 از ژن گلیکوپروتئین g ویروس تب بی‏ دوام گاوی توسط سازه نوترکیب pet24-g1 در اشرشیاکلی

تب بی‏دوام گاوی (bef) یک بیماری ویروسی در گاو و گاومیش است که در سال‏های اخیر در برخی از استان‏های ایران به ویژه مناطق جنوبی و گرم دیده شده است.  گلیکوپروتئین g، آنتی‏ژن اصلی حفاظتی ویروس تب‏ بی‏دوام گاوی (befv) و هدف آنتی‏بادی‏های خنثی کننده ضدویروسی است.  هدف از مطالعه ی حاضر، کلونینگ و بیان اپیتوپ g1 از ژن گلیکوپروتئین g ویروس bef ‏در یک سیستم پروکاریوتی بود.  به این منظور، اپیتوپ g1 درون ناقل بیانی پروکاریوتی (+)pet24a، تحت کنترل پروموتر t7، کلون و سپس سازه ی نوترکیب pet24-g1 به سویه ی rosetta اشرشیاکلی منتقل شد.  بیان پروتئین نوترکیب با استفاده از روش‏های sds-page و ایمونوبلات بررسی شد.  در آنالیز sds-page پروتئینی با وزن مولکولی تقریبی 18 کیلو دالتون رویت شد که با وزن مورد انتظار برای پروتئین نوترکیب متصل به دنباله ی 6 تایی هیستیدین هم خوانی داشت.  آنالیز ایمونوبلات نشان‏ داد که پروتئین g1 بیان شده به طور اختصاصی با سرم پلی کلونال موشی حاوی آنتی‏بادی ضد bef واکنش داد.  بنابراین در این مطالعه پروتئین g1 از ویروس bef با موفقیت توسط سازه ی نوترکیب pet24-g1 در اشرشیاکلی بیان شد.  براساس نتایج این مطالعه می توان ایمنی زایی و کارآیی این محصول را به عنوان کاندید احتمالی جهت تولید یک واکسن زیرواحدی علیه این ویروس در مدل های حیوانی بررسی نمود.

Expression of the G1 epitope of bovine ephemeral fever virus G glycoprotein gene by pET24G1 recombinant construct in Escherichia coli

Bovine ephemeral fever (BEF) is a viral disease of cattle and water buffalo seen in some provinces of Iran, generally southern and warm regions in recent years. The G glycoprotein is the main protective antigen of the bovine ephemeral fever virus (BEFV) and the target of antiBEFV neutralizing antibodies. The aim of the present study was cloning and expression of the G1 epitope of BEF virus G glycoprotein gene in a prokaryotic system. For this purpose, the G1 epitope was cloned in a prokaryotic expression vector, pET24a(+), under the control of the T7 promoter and subsequently the recombinant pET24G1 construct was transformed into Rosetta strain of Escherichia coli. Expressed recombinant protein was analyzed using SDSPAGE and immunoblotting methods. SDSPAGE analysis showed that a protein with ~18 kDa molecular weight, consistent with the expected molecular weight of recombinant protein fused to 6xHis tag, was expressed. Immunoblotting analysis showed that the expressed G1 protein specifically reacted with a mouse polyclonal serum against BEFV. Thus, in this study the G1 protein of BEFV was successfully expressed by the pET24G1 recombinant construct in Escherichia coli. Based on the results of this study, immunization and the efficacy of this product can be consider as a possible candidate for the production of subunit vaccine against the virus in animal models.