همسانه سازی و بیان ژن پروتین غشای خارجی 31 (omp31) باکتری بروسلا ملی تنسیسrev1

بیماری بروسلوز به عنوان یک بیماری مشترک بین انسان و دام به واسطه تکثیر باکتری بروسلا در داخل سلول‌های پستانداران اتفاق می‌افتد. omp31 یکی از پروتئین‌های غشای خارجی این باکتری می‌باشد که به واسطه نقش مهمی که در تحریک سلول‌های cd8+ t و cd4+ t دارد می‌تواند سبب مهار بیماری بروسلوز گردد. در این بررسی ژن omp31 به عنوان یکی از ژن های موثر در بیماری بروسلا مورد بررسی مولکولی از نظر آنالیز فیلوژنی و همچنین مستعد بودن پروتئین نوترکیب این ژن جهت طراحی واکسن بر علیه بیماری بروسلوز مورد مطالعه قرار گرفته است. از آغازگرهای اختصاصی به منظور تکثیر dna مستخرج از باکتری بروسلا ملیتنسیس سویه rev1 و تایید مراحل مطالعه استفاده گردید. جهت تکثیر این ژن از وکتور کلونینگ pmb57r/t و جهت بیان از وکتور pet32a که دارای ساختار trx جهت افزایش بیان میباشد استفاده گردید. پس از تکثیر قطعه bp 723 ،قطعه مورد نظر به روش ta کلونینگ درون وکتور کلونینگ منتقل و به روش شوک حرارتی وارد میزبان کلونینگ گردید. سپس نمونه تایید شده به درون وکتور بیانی ساب کلون گردید. القا بیان با iptg صورت گرفت و آنالیز پروتئین‌های تولید شده با ژل نشاندهنده بیان موفقیت آمیز پروتئین نوترکیب می‌باشد. نتایج مفید حاصل از این مطالعه بیانگر این است که این آنتی ژن می‌تواند به عنوان یه کاندید مناسب در پژوهش‌های آتی به منظور طراحی واکسن نوترکیب بر علیه بیماری بروسلا استفاده گردد.

Cloning and expression of outer membrane protein 31 (Omp31) Brucella melitensis Rev1

Brucellosis is a wellknown infection among domestic animals which caused by Brucella bacterium. Omp31 is an outer membrane protein that play important roles in simulate CD4+ T and CD8+ T cells. In current study molecular, cloning and also phylogenic analysis of Omp31 gene as a candidate for designing subunit vaccine against brucella was investigated. Amplifying performed using specific primers. Cloning of this gene performed using pMB57R/T vector in TOP10F`strain of E.coli as host. Also, pET32a vector used for expression. Omp31 gene with 723 bp amplified successfully. After that clone using TA cloning approach within cloning vector. Expression of this gene has done in pET32a vector by inducing IPTG. Results confirmed with sequencing and SDS PAGE showed 48 KD protein band correctly. According this results we can propose this gene as a candidate for designing subunit vaccine against brucella in future study.According this results we can propose this gene as a candidate for designing subunit vaccine against brucella in future study.