ساخت همسانه عفونت‌زای ویروئید‌های مرکبات و اثبات بیماری‌زایی آنها

ویروئیدها آر ان ا های بیماری‌زا در گیاهان هستند که توانایی رمز کردن پروتئین را ندارند. تاکنون هفت ویروئید از چهار جنس خانواده pospiviroidaeاز مرکبات گزارش شده‌اند.با ساخت همسانه عفونت زای ویروئید های مرکبات امکان سنجش بیماری زایی آنها فراهم شد. از آر ان ا کل استخراج‌شده از نهال پرتقال خونی مورو ژنوم کامل ویروئیدهای cevd، hsvd، cbcvd، cdvd، cvdv و cblvd در واکنش rtpcr تکثیر و توالی‌یابی شد. سپس ژنوم کامل هر ویروئید بطور جداگانه در ناقل دوتایی pbin62sk تحت کنترل پیشبر s35 ویروس موزائیک گل‌کلم (cauliflower mosaic virus, camv) قرار گرفت. بیماری زایی ویروئیدها در گیاهان خیار(cucumis sativus)، گوجه‌فرنگی (solanum lycopersicum) و نارنج سه برگ (poncirus trifoliata) از طریق مایه‌زنی اگروباکتریوم حاوی سازه‌های عفونت‌زای آنها انجام شد. سه هفته پس از مایه‌زنی حضور ویروئیدها در برگ های جدید گیاهان مایه‌زنی‌شده با آزمون rtpcr با استفاده از آغازگرهای اختصاصی و هیبریداسیون نقطه ای با کاوشگر اختصاصی هر ویروئید تائید شد. پنج هفته پس از مایه‌زنی، علائم ریزبرگی، پیسک و روخمشی توسط cvdv و cbcvd، پیسک توسط cdvd و علایم روخمشی و بدشکلی برگ بوسیله cevd، hsvd و cblvd در برگ های گوجه فرنگی ظاهر شدند. مایه‌زنی مکانیکی عصاره آلوده به گیاهان سالم نیز علائم مشابهی را تولید کرد. ردیابی ویروئید در برگ های جدید گیاهان مایه‌زنی‌شده بیانگر عفونت‌زایی سازه ساخته شده است. همسانه‌های عفونت‌زای cevd، hsvd و cbcvd پیش تر ساخته شده است ولی این اولین گزارش از ساخت همسانه عفونت‌زای ویروئیدهای cdvd، cblvd وcvdv است.