کلونینگ و افزایش بیان موقت ژن NRF2 در سلولهای بنیادی مزانشیمی بهواسطه سیستم بیانی آدنوویروسی بر مبنای فناوری Gateway
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
محمد زاده محمد ,حبیبی رودکنار مهریار
|
|
منبع
|
journal of kermanshah university of medical sciences - 1392 - دوره : 17 - شماره : 5 - صفحه:273 -286
|
|
چکیده
|
زمینه: افزایش بقای سلولهای بنیادی مزانشیمی پس از پیوند، کارایی این سلولها را در درمان افزایش میدهد. بههمین دلیل، دستکاری سلولهای بنیادی مزانشیمی با ژنهای محافظتکننده سلولی همانند nf-e2 related factor-2 (nrf2) جهت بهبود کارایی سلول درمانی مهم است. هدف این مطالعه، کلونینگ و افزایش بیان موقت ژن nrf2 در سلولهای بنیادی مزانشیمی توسط سیستم بیانی آدنوویروسی میباشد.روشها: ژن nrf2 از سلولهای بنیادی مزانشیمی جدا و توسط واکنش توپوکلونینگ، به وکتور pentr/topo/d کلون گردید. سپس با استفاده از فناوری gateway، ژن nrf2 از وکتور pentr/topo/d به وکتور آدنوویروسی منتقل شد. جهت تولید ذرات آدنوویروسی، وکتور آدنوویروسی نوترکیب به سلولهای 293a منتقل گردید. در مرحله بعد، آدنوویروسهای نوترکیب محتوی ژن nrf2، سلولهای بنیادی مزانشیمی را آلوده کردند.یافتهها: ژن nrf2 با موفقیت جداسازی و کلون شد و صحت توالی آن توسط توالی یابی deoxyribonucleic acid (dna) تایید گردید. افزایش بیان nrf2 مورد ارزیابی قرار گرفت. این افزایش بیان توسط سیستم بیانی آدنوویروس، موقت بود.نتیجهگیری: افزایش بیان ژن nrf2 در سلولهای بنیادی مزانشیمی توسط سیستم بیانی آدنوویروس بهدلیل بیان موقت آن، یک وسیله بسیار با ارزش میباشد. افزایش بیان دایمی ژنها در سلولهای بنیادی مزانشیمی مجاز نمیباشد.
|
|
کلیدواژه
|
سلولهای بنیادی مزانشیمی ,NRF2 ,مهندسی ژنتیک ,وکتورهای ژنتیکی و وکتور کلونینگ
|
|
آدرس
|
دانشگاه علوم پزشکی گناباد, ایران, مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران، موسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون, ایران
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|