استفاده از سولفات روی به منظور حذف هموگلوبین در اندازه‫گیری میزان و فعالیت آنزیم کاسپاز 3 گلبول های قرمز به روش‫های الایزا و کالریمتری

زمینه و هدف: سولفات روی بدلیل ایجاد پیوند کوئوردینانس با گروه های rبرخی اسیدهای آمینه مانند هیستیدین و سیستئین موجب رسوب پروتئین ها می گردد. هدف از این مطالعه یافتن غلظت مناسب از سولفات روی برای رسوب هموگلوبین هست که دراندازه گیری میزان و فعالیت آنزیم کاسپاز 3 داخل گلبول های قرمز با روش های به ترتیب الایزا و کالریمتری ایجاد تداخل می نماید. روش کار: در این مطالعه، تنش های اسمزی هیپرتونیک و هیپوتونیک بر روی گلبول های قرمز اعمال گردید. علاوه بر این، محیط غیر تنشی ایزوتونیک به عنوان کنترل بکار گرفته شد. سلول ها در دمای 37 درجه سانتی گراد در بازه های زمانی 15 دقیقه و 24 ساعت قرار داده شدند. بعد از لیز این سلول ها بوسیله دستگاه اولترا سونیک هوموژنایزور و متعاقب آن حذف غشاهای گلبول های قرمز با کمک سانتریفوژ شرایط مطلوب هم از نظر غلظت سولفات روی و نیز مدت زمان دادن فرصت برای اتصال سولفات روی به هموگلوبین و مدت زمان مناسب برای سانتریفوژ بصورت تجربی و پلکانی انجام گردید و بعد از هموگلوبین زدایی میزان و فعالیت آنزیم کاسپاز 3 در نمونه ها اندازه گیری گردید. یافته ها: غلظت مناسب سولفات روی 6 میلی مول، مدت زمان مطلوب اتصال سولفات روی به هموگلوبین 10 دقیقه در دمای آزمایشگاه و نیز مدت زمان سانتریفوژ 30 دقیقه در 3000 دور در دقیقه بدست آمد. نتیجه گیری: نتایج این تحقیق نشان داد که سولفات روی با غلظت 6 میلی مول قادر هست که بدون تاثیر بر روی میزان و فعالیت آنزیم کاسپاز 3 موجب رسوب و حذف هموگلوبین شود.

hemoglobin removal by zinc sulfate to assay level and activity of red blood cell caspase 3 using elisa and colorimetric methods

background & objectives: zinc sulfate binds to the r group of some amino acids, such as histidine and cysteine, resulting in protein precipitation. in an elisa and colorimetric experiments, we determined the optimal concentration of zinc sulfate to precipitate hemoglobin, which in turn affects the level and activity of caspase 3 in red blood cells. methods: osmotic stress was induced on red blood cells under hypertonic and hypotonic conditions. an isotonic condition was used as a control without osmotic stress. the cells were incubated at 37oc for 15 min and 24 hrs. different concentrations of zinc sulfate were set up experimentally, stepwise after the lysis of rbc samples with ultrasound waves and removal of cell membranes by centrifugation. zinc sulfate was allowed to bind to hemoglobin at different time intervals at room temperature. afterward, hemoglobin was precipitated at various time intervals through centrifugation. the supernatants were then measured by elisa and colorimetric methods for caspase 3 level and activity. results: the optimal conditions were found to be 6 mm zinc sulfate, 10 min incubation at room temperature to bind zinc sulfate to hemoglobin, and 30 min centrifugation at 3000 rpm to precipitate hemoglobin. conclusion: this study showed that zinc sulfate with a concentration of 6 mm precipitates and removes hemoglobin without affecting the level or activity of caspase 3.