بررسی ویژگی‌های تمایزی و رفتاری سلول‌های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی انسانی دستکاری شده با حامل لنتی ویروسی

زمینه و هدف: ایمیونوژنیسیتی کم و مهاجرت هدفمند سلول های بنیادی مزانشیمی به مناطق التهابی، این سلول ها را به بهترین وسیله برای رساندن محصولات ژنی و یا درمانی معرفی نموده است. به منظور الحاق ژن اکتوپیک به داخل سلول های بنیادی، وکتورهای لنتی ویروسی بعنوان یکی از ابزارهای کارآمد مطرح می‫گردند. لذا ارزیابی تاثیر حامل های لنتی ویروسی بر ویژگی های هویتی، رفتاری و عملکردی سلول های بنیادی می تواند ایمن بودن استفاده از وکتورها را در دستکاری سلولی و ژن تراپی نشان دهد.روش کار: در ابتدا سه وکتور لنتی ویروسی با روش کلسیم فسفات بر روی سلول های hek-293t اضافه گردید. پس از تائید بیان پروتئین سبر فلورسنتی در بیش از 80 درصد سلول های hek-293t، سوپ ویروسی جمع آوری و تغلیظ شد. سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق شده از بافت چربی انسانی (hascs) با ویروس تغلیظ شده ترانسفکت شدند. پس از حذف سلول های ترانسدیوس نشده با پرومایسین، سلول های hasc ترانسدیوس شده از نظر ایمونوفنوتایپینگ و تمایز به آدیپوسایت و استئوسایت مورد ارزیابی قرار گرفتند. ویژگی های رفتاری مانند زنده بودن، مهاجرت و تهاجم به ترتیب با روش mtt و transwell مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: در مطالعه حاضر تفاوت معنی داری در بیان شاخص‫های تمایزی cd29، cd34، cd73 و تمایز به بافت استخوانی و چربی در بین دوگروه تست وکنترل دیده نشد. همچنین در بررسی ویژگی های رفتاری نظیر قدرت تکثیر، تهاجم و مهاجرت سلول های بنیادی، تفاوت معنی داری بین دو گروه مورد مطالعه وجود نداشت. نتیجه گیری: یافته های این مطالعه نشان داد که وکتور لنتی ویروسی اثرات سوئی بر ویژگی های هویتی و عملکردی سلول های بنیادی ندارد. بنابراین می توانند در دستکاری ژنی سلول هدف مورد استفاده قرار گیرند.

the study of differential and behavioral characteristics of manipulated human adiposederived mesenchymal stem cells by lentiviral vector

background objectives: low immunogenicity and targeted migration of mesenchymal stem cells to inflammatory sites have introduced these cells as the best vehicle for the delivery of gene or therapeutic products. lentiviral vectors can be used as an efficient vehicle for inserting ectopic genes into stem cells. therefore, the evaluation of the effect of lentiviral vectors on the identity, behavior and functional characteristics of the stem cells can show that vectors are safe tools in cell manipulation and gene therapy. methods: at first, three vectors of lentivirus were added to hek293t cells using calcium phosphate method. after confirming the expression of gfp protein in more than 80% of hek293t cells, viral supernatant was collected and concentrated. human adiposederived mesenchymal stem cells (hascs) were transduced with condensed viruses. after the elimination of the nontransduced cells by puromycin, transduced hascs were evaluated for immunophenotyping and differentiation to adipocyte and osteocyte. behavioral characteristics such as viability, migration and invasion were analyzed using mtt and transwell methods, respectively. results: in the current study, there was no significant difference in the expression of cd29, cd34, cd73 and differentiation to adipocyte and osteocyte in the test group when compared to the control group. moreover, there was no significant difference between two study groups in the behavioral characteristics such as proliferation, invasion and migration. discussion: the findings of this study declare that lentiviral vectors do not have adverse effects on the identity and functional characteristics of stem cells. therefore, they can be used in gene manipulation of the target cell.