nf-κb فعال شده با هایپرگلایسمی، بیان microrna-146a را در سلول‌های اندوتلیال عروقی بند ناف انسانی افزایش می‌دهد

زمینه و هدف: فاکتور هسته ای کاپای b (nf kappa;b)، به عنوان یک عامل رونویسی اصلی، در پیشرفت و توسعه التهاب عروق ریز ناشی از هیپرگلیسمی نقش مهمی ایفا می کند. هیپرگلیسمی باعث فعال شدن nf kappa;b و به دنبال آن افزایش سیتوکین های پیش برنده التهاب همچون tnf alpha;، il6 و il1 beta; و گسترش التهاب می شود. مطالعات جدید نقش microrna146a (mir146a) را در پاتوژنز دیابت، از طریق یک حلقه فیدبک منفی وابسته به nf kappa;b نشان داده اند. اگرچه مطالعات بی شماری بیانگر تغییر غلظت پلاسمایی mir146a طی هایپرگلایسمی بوده اند، اما هنوز سلول های منشاء این تغییر مشخص نیستند. بدین منظور این مطالعه تجربی مداخله ای برای ارزیابی نقش nf kappa;b بر میزان بیان ژن mir146a در سلول های اندوتلیال عروقی بندناف انسان (huvecs) در شرایط هیپرگلیسمی طراحی شد.روش کار: سلول های huvec در محیط رشد سلول اندوتلیال در شرایط گلوکز طبیعی (5 میلی مول در لیتر) و شرایط هیپرگلیسمی (25 میلی مول در لیتر) در پلیت 6 چاهکی به مدت 24 ساعت کشت داده شدند. اضافه شدن 30 میکرومول در لیتر jsh23 به عنوان بازدارنده انتقال nf kappa;b به هسته، 30 دقیقه قبل از ایجاد هیپرگلیسمی صورت گرفت. جهت اندازه گیری میزان بیان mir146a و nf kappa;b روش quantitative real time pcr استفاده شد. میزان فعالیت nf kappa;b با روش elisa سنجیده شد.یافته ها: هیپرگلیسمی میزان فعالیت و میزان بیان mrnaی nf kappa;b را در سلول های huvec به طور معنی داری افزایش داد. همچنین میزان بیان mir146a در گروه هیپرگلیسمی در مقایسه با گروه کنترل، به طور محسوسی افزایش یافت. از طرف دیگر، jsh23 باعث جلوگیری از افزایش mir146a و نیز افزایش بیان mrnaی nf kappa;b در سلول های هیپرگلیسمی گردید.نتیجه گیری: این یافته نشان می دهد که nf kappa;b بیان ژن mir146a را در فاز اولیه هیپرگلیسمی در سلول های huvec افزایش می دهد.

Hyperglycemia- Induced NF-κB Activation Increases microRNA-146a Expression in Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Background objectives: Nuclear Factor kappa B (NF kappa;B), a master switch transcription factor, plays a critical role in the progression and development of hyperglycemiainduced microangiopathy. Hyperglycemia activates NF kappa;B, and subsequently increases proinflammatory cytokines such as TNF alpha;, IL6 and IL1 beta; leading to development of inflammation. Some new studies have revealed the involvement of microRNA146a (miR146a) in the pathogenesis of diabetic complications through an NF kappa;Bdependent negative feedback loop manner. Despite numerous reports indicating changes of plasma miR146a during hyperglycemia, the origin of this change remains unclear. This study was designed to evaluate the role of NF kappa;B on the miR146a gene expression level in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) during a hyperglycemic condition.Methods: HUVECs were cultured in normal glucose (5 mmol/L), and hyperglycemic (25 mmol/L) endothelial cell growth medium in the six well plates for 24 h. JSH23 (30 mu;mol/L), as an inhibitor of NF kappa;B translocation to the nucleus, was added to the culture medium, 30 min before induction of hyperglycemia. Quantitative Real Time PCR was performed to measure the expression levels of miR146a and mRNA NF kappa;B. NF kappa;B activity was measured by Elisa.Results: Hyperglycemia markedly increased the NF kappa;B activity and mRNA level in HUVECs. The expression of miR146a significantly increased in hyperglycemic group compared to the normoglycemic group. On the other hand, JSH23 prevented from miR146a increment in hyperglycemic group and also it increased the mRNA expression level of NF kappa;B in this group.Conclusion: This result shows that NF kappa;B increases the gene expression of miRNA146a in the early phase of hyperglycemia in HUVECs.