ساخت ناقل بیانی Pfum003 دارای خاصیت ترشح خارج سلولی

سابقه و هدف: پروبیوتیک ها میکروارگانیسم های مفیدی هستند که در طی قرن ها در بهبود مواد غذایی و هم چنین ارتقاء سلامت استفاده می شوند. امروزه پروبیوتیک های نوترکیب به عنوان وسیله انتقال برای بیان و انتقال هدفمند مولکول های بومی یا نوترکیب به سطوح مخاطی دستگاه گوارش در تغذیه و سلامت استفاده می شوند. لاکتوکوکوس لاکتیس یک کاندیدای بالقوه برای تولید پروتئین های زیستی مفید است. ازآن جا که برای این باکتری ناقل مناسبی که دارای توالی سیگنال برای ترشح خارج سلولی باشد وجود ندارد لذا هدف ما از این مطالعه افزایش راندمان بیان پروتئین های نوترکیب در خارج از سلول با استفاده از واردکردن توالی سیگنال پپتید usp45 به ناقل پلاسمیدی pbu003 است.مواد و روش ها: usp45 سیگنال پپتیدی دارای 81 باز است که در مطالعات زیادی به عنوان افزایش دهنده بیان نیز معرفی شده است. در این مطالعه توالی سیگنال usp45 ساخته شد و سپس با استفاده از واکنش لیگاسیون به پلاسمید pbu003 انتقال یافت. پس از آن به باکتری اشریشیاکلی سویه mc1061 منتقل شد. پلاسمید نوترکیب به pfum003 نام گذاری شد.یافته ها: تعیین توالی پلاسمید حاوی usp45 نشان داد که دارای ساختار پلاسمیدی و توالی سیگنال صحیح است و تطابق کامل با توالی های الگو (eu382094.1) گزارش شده در بانک ژنی ncbi دارد.نتیجه گیری: پلاسمید نوترکیب ساخته شده به pfum003 نام گذاری شد. این پلاسمید نوترکیب به لحاظ ساختاری صحیح و جهت انتقال به پروبیوتیک ها مناسب می باشد