بررسی میزان فراوانی ژن shv کد‌کننده‌ی esbl در سویه‌های e.coli جدا شده از نمونه‌های ادراری مراجعه‌کنندگان به بیمارستان و مراکز درمانی شهرستان سمنان

هدف: گزارشات متعددی، حاکی از شیوع مقاومت‌های چندگانه دارویی با واسطه انواع مختلف(esbl lactamases extended spectrum beta) از جمله آنزیم‌های حاصل از بیان ژن shv در نقاط مختلف دنیا  موجود می‌باشد، که یکی از معضلات عمده درمانی و پزشکی می‌باشد. امروزه، بررسی نقش باکتری اشریشیاکلی در انواع عفونت‌ها از جمله عفونت‌های بیمارستانی، میزان استفاده از آنتی‌بیوتیک‌های مختلف در درمان، با توجه به افزایش روز‌افزون مقاومت باکتری‌های عامل عفونت در برابر آنتی‌بیوتیک‌ها یک ضرورت است. هدف از اجرای این طرح پژوهشی، بررسی میزان شیوع ژن shv به عنوان یکی از ژن‌های کد‌کننده  esbl در باکتری‌های مولد عفونت  ازجمله در سویه‌های e. coli بود.مواد و روش‌ها: نمونه‌برداری و جداسازی اشریشیاکلی از نمونه‌های جمع‌آوری شده از مراجعین مشکوک به عفونت ادراری با استفاده از روش‌های استاندارد و آزمون آنتی‌بیوگرام با استفاده از روش دیسک- دیفیوژن بر روی آن‌ها انجام شد. به منظور تشخیص قطعی تولید آنزیم‌های بتالاکتاماز وسیع الطیف (esbls) با استفاده از زوج دیسک‌های آنتی‌بیوتیکی سفتازیدیم، سفوتاکسیم، سفوتاکسیم، و سفتازیدیم/ با و بدون کلاوولانیک اسید خریداری شده از شرکت mast انگلیس مورد آزمون قرار گرفتند. با استخراج dna از آن‌ها و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی طراحی، ارزیابی و تهیه شده برای ژن shv و انجام pcr وجود و یا فقدان ژن shv در سویه‌های فوق، مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج با استفاده ازآزمون آماری مجذور کای (2×، chi-square) و نرم‌افزار 16spss آنالیز گردید.یافته‌ها: سویه‌های باکتری e. coli از 151 نمونه ایزوله ادراری (37.75%) جدا گردید. ایزوله‌های مقاوم به نیتروسفین، به عنوان سویه‌های احتمالی تولید‌کننده بتالاکتامازهای وسیع الطیف (esbls) تلقی شدند، نتیجه آزمون فنوتیپی تائیدی، بر روی سویه‌های esbl مثبت (+) احتمالی، در 33 مورد (67.47%) آن‌ها مثبت بود. با انجام pcr با استفاده از زوج پرایمرهای طراحی و تهیه شده برای تشخیص و شناسایی ژن shv، نتیجه این آزمایش نیز در 9 مورد (72.72%) آن‌ها مثبت بود.نتیجه‌گیری: به کارگیری روش‌های مولکولی در کنار روش‌های فنوتیپی جهت تشخیص دقیق عوامل عفونی، حتی فرم‌های زنده اما غیر قابل کشت آن‌ها (viable but nonculturable, vbnc) و ژن‌های مقاومت، می‌تواند کارآئی روش‌های اپیدمیولوژی  مولکولی در پیگیری و مبارزه با عفونت‌ها و از جمله عفونت‌های بیمارستانی را افزایش دهد. 

investigating the frequency of shv gene encoding esbl in e.coli strains isolated from urine samples of patients who were referred to hospitals and medical centers in semnan city

introduction: numerous reports indicate the spread of multiple drug resistances through different types of extended spectrum beta lactamase (esbl), including enzymes resulting from shv gene expression in different parts of the world, which is one of the major medical and therapeutic problems. nowadays, investigating the role of escherichia coli bacteria in various infections, including hospital infections, and the amount of use of different antibiotics in treatment, considering the increasing resistance of bacteria causing infection to antibiotics, is a necessity. the purpose of this research project was to investigate the prevalence of the shv gene as one of the genes encoding esbl in infectious bacteria including e. coli strains.materials and methods: sampling and isolation of escherichia coli collected from clients suspected of urinary tract infection using standard methods and antibiogram test using disc-diffusion method were performed on them. to identify strains producing broad-spectrum beta-lactamases (esbls), nitrocephene-resistant isolates rechecked with the combined disc method to definitively detect the production of broad-spectrum beta-lactamase enzymes (esbls) with the use of pairs of ceftazidime, cefotaxime, cefotaxime, and ceftazidime antibiotic discs with and without clavulanic acid purchased from british mast company were tested. by extracting dna from them using specific primers designed, evaluated, and prepared for the shv gene, and performing pcr, the presence or absence of the shv gene in the above strains was evaluated.results: e. coli strains were isolated from 151 urinary samples (37.75)%. isolates resistant to nitrocephene were considered as possible strains producing extended-spectrum beta-lactamases (esbls), the result of the confirmatory phenotypic test on probable positive (+) esbl strains, in 33 cases (67.47) % of them were positive. by performing pcr using a pair of specific primers designed and prepared to detect and identify the shv gene, the result of this test was also positive in 9 cases (72.72) % of them.conclusion: using molecular methods along with phenotypic methods to accurately diagnose infectious agents, even their vbnc (viable but non-culturable) forms, and resistance genes can make the effectiveness of molecular epidemiology methods in tracking and increasing the fight against infections, including hospital infections.