بیان، تخلیص و ارزیابی ایمنی‌ زایی پروتئین کایمر دربردارنده نواحی ایمونوژن از فلاژلین و اینتیمین علیه باکتری e.coli o157:h7

هدف: اشریشیاکلی خونریزی‌دهنده روده‌ای (ehec) و سروتیپ o157:h7 یکی از مهم‌ترین بیماری‌زاهای عامل اسهال می‌باشند. باکتری با تولید سم شبه شیگا باعث تخریب سلول‌های اپیتلیال و در موارد حاد سندرم اورمی همولیتیک (hus) می‌شود. درمان آنتی‌بیوتیکی علیه این عامل کارآمد نبوده بلکه باعث تشدید تولید سم شیگا می‌شود. طراحی ایمونوژن‌های کایمر می‌تواند یکی از راه‌بردهای موثر علیه باکتری باشد. هدف از این تحقیق، بررسی ایمنی‌زایی آنتی‌ژن کایمر نوترکیب در بردارنده نواحی ایمونوژن از  پروتئین‌های فلاژلین و اینتیمین علیه باکتری e.coli o157:h7 بود.مواد و روش‌ها: بخش‌های ایمونوژن از پروتئین‌های فلاژلین و اینتیمین برای ارزیابی‌های بیوانفورماتیک انتخاب گردید. پلاسمید نوترکیب pet28a- h7-int به e.coli bl21 (de3) منتقل شد. بیان پروتئین کایمر با iptg  القا و نتایج با sds-page ارزیابی گردید. پروتئین نوترکیب با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی ni-nta تخلیص و با روش وسترن بلات تائید شد. ایمنی‌زایی در موش با پروتئین خالص انجام و تیتر آنتی‌بادی به روش elisa تعیین گردید. ریزش باکتری و مرگ‌ومیر در موش‌ها مورد بررسی قرار گرفت. یافته‌ها: بیان پروتئین نوترکیب درمیزبان e.coli منجر به تولید پروتئین h7-int با وزن 70 کیلودالتون شد. میزان پروتئین خالص شده برای هر لیتر از محیط 80 میلی‌گرم بود. ایمنی‌زایی موش‌ها با پروتئین نوترکیب، باعث القای ایمنی هومورال شد. متعاقب خوراندن باکتری زنده، ریزش باکتری در مدفوع موش‌های ایمن به طور معنی‌داری (cfu/ml 102) کاهش یافت. 100 درصد و 80 درصد از موش‌های ایمن به ترتیب پس از تزریقld50 10  و ld50100 از باکتری، زنده ماندند.نتیجه‌گیری: نتایج نشان داد، پروتئین کایمر ایمنی محافظتی ‌را در موش‌ها ایجاد می‌کند و می‌تواند به ‌عنوان یک کاندید ایمونوژن علیه e.coli o157:h7 مورد بررسی قرار گیرد. 

expression, purification, and immunization of a chimeric protein containing immunogenic regions of flagellin and intimin proteins against e. coli o157: h7

introduction: enterohemorrhagic escherichia coli (ehec) and serotype o157: h7 is one of the most important diseases causing diarrhea. shiga-like toxin secreted by the bacteria destroys epithelial cells and, in acute cases, causes hemolytic uremic syndrome (hus). antibiotic therapy is not effective against this pathogen, because it increases the production of shiga toxin. designing chimeric immunogens can be one of the most effective strategies against bacteria. this study aimed to evaluate the immunogenicity of recombinant chimeric antigen-containing immunogenic regions of flagellin and intimin proteins against e. coli o157: h7.materials and methods: immunogenic regions of flagellin and intimin proteinswere selected for bioinformatics evaluations. plasmid h7-int pet28a- was transferred to e. coli bl21(de3). expression of the recombinant chimeric protein was induced by iptg and evaluated by sds-page. the recombinant protein was purified using a ni-nta affinity chromatography column and confirmed by western blotting. immunogenicity of the protein was performed in mice with pure protein and antibody titers were determined by elisa. bacterial shedding and mortality in mice were examined. results: expression of recombinant protein in e.coli led to the production of a protein with a molecular weight of 70 kda. the total yield of purified protein was 80 mg/l. immunization of mice with recombinant protein induced humoral immunity. bacterial shedding in immunized mice’s feces was significantly reduced (102 cfu / ml). 100% and 80% of the immunized mice survived challenged with 10ld50 and 100ld50 of bacteria respectively.conclusion: the results showed that the chimeric protein provides good protective immunity in mice and can be considered an immunogenic candidate against e. coli o157: h7.