بارگذاری آنتی‌ژن کایمر c-cftxa-stxb زهر عروس دریایی در کوپلیمر سه بلوکه pla-peg-pla و بررسی ایمنی‌زایی آن در موش سوری

هدف: زهر عروس دریایی حاوی انواع پروتئین‌های فعال زیستی است که می‌تواند جهت تهیه واکسن مورد بررسی قرار گیرد. پلی‌لاکتیک‌اسید، پلیمر زیست تخریب‌پذیر می‌باشد که در سامانه‌های واکسن کاربرد دارد. هدف از این مطالعه کپسوله‌سازی پروتئین کایمر نوترکیب c-cftx1-stxb زهر عروس دریایی در کوپلیمر سه بلوکه pla-peg-pla و بررسی تیتر آنتی‌بادی و ایمنی‌زایی ایجاد شده در موش سوری می‌باشد. مواد و روش‌ها: پس از تخلیص، تایید پروتئین توسط وسترن‌بلات انجام شد، سپس آنتی‌‌ژن درکوپلیمر سه‌بلوکه با استفاده از روش تبخیر حلال بارگذاری و خصوصیات نانوذرات تهیه شده توسط میکروسکوپ الکترونی و پراش نور پویا مورد بررسی قرار گرفت. در ادامه آنتی‌‌ژن کپسوله و آزاد به همراه ادجوانت فروند کامل و ناقص، pbs و pla-peg نانویی شده به موش‌های سوری در چهار نوبت به صورت زیر جلدی تزریق شد. در انتها میزان آنتی‌بادی تولید شده در سرم به دست آمده از حیوان آزمایشگاهی به‌وسیله الایزا غیر مستقیم اندازه‌گیری شد و زنده‌مانی حیوانات ایمن شده در چالش با زهر عروس دریایی مورد بررسی قرار گرفت. یافته‌ها: نتایج بررسی نانوذرات تولیدی نشان داد که نانوذرات تهیه شده از کمیت و کیفیت خوبی برخوردارند. اندازه نانوذرات تولیدی 176.1 نانومتر و بازده کپسوله‌سازی پروتئین در نانوذرات برابر 71 درصد بود. در انتها نشان داده شد موش‌های ایمن شده پس از چالش با 50 برابر ld50 زهر عروس دریایی زنده ماندند و تیتر آنتی‌بادی تولیدی ارتباط مستقیمی با مقاومت حیوان آزمایشگاهی داشت.نتیجه‌گیری: با توجه به عدم خاصیت کاردیوتوکسیستی و نوروتوکسیستی پروتئین نوترکیب c-cftx1-stxb و هم‌چنین نتایج به دست آمده می‌توان نانوذرات pla-peg-pla را به عنوان حامل مناسب جهت تهیه واکسن علیه زهر عروس دریایی برای بررسی‌های بیش‌تر پیشنهاد داد.

C-CfTXA-STxB chimeric antigen loading in PLA-PEG-PLA tri-block copolymers and its immunization in mice

Introduction: The venom of Jellyfish venom contains a variety of bioactive proteins that can be studied for vaccine application. PolyLactic Acid is a biodegradable polymer that is used in vaccine systems. The aim of this study was to encapsulate the CCfTX1STxB protein into PLAPEGPLA threeblock copolymer and its immunogenicity study in mice.Materials and Methods: After purification, the protein was confirmed by Western Blot. Then, the antigen was loaded in the threeblock copolymer using the solvent evaporated method and prepared nanoparticles characteristics by SEM electron microscopy and DLS. Following encapsulated and free antigen with complete and incomplete adjuvant, PBS and PLA_PEGPLA nano were injected subcutaneously into the mice four times. In the end, the amount of antibody produced was measured by indirect ELISA and the survival of immunized animals against challenges by jellyfish venom was studied.Results: The results showed that the prepared nanoparticles have good quality and quantity. The size of the nanoparticles was 176.1 nm and the protein encapsulation efficiency was 71%. In the end, it was shown that immunized mice survived the challenge with the venom and the production of antibody titers was directly related to laboratory animal resistance.Conclusion: Regarding the lack of cardiotoxicity and neurotoxicity of the recombinant CCfTX1STxB protein, as well as the results, PLAPEGPLA nanoparticles could be suggested as suitable carriers for the preparation of a vaccine against jellyfish venom for further investigation.