بررسی تیتر آنتی‌بادی نانوسفر کوپلیمری دو بلوکه pla-peg حاوی پروتئین نوترکیب کایمریک آنتی‌ژن محافظ و فاکتورکشنده باسیلوس آنتراسیس

هدف: تا به امروز واکسن‌های زیادی برای بیماری سیاه‌زخم ساخته شده؛ اما هنوز واکسنی ایده‌آل تولید نشده است. در این تحقیق، برای رفع مشکلات ناشی از واکسن‌های موجود و افزایش کارایی واکسن پیشنهادی، از پروتئین نوترکیب کایمریک حاوی دُمین 1 فاکتور کشنده و دُمین 4 آنتی‌ژن محافظ باسیلوس آنتراسیس در نانوکپسول کوپلیمری استفاده شد.مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، برای تولید نانوکپسول‌های حاوی پروتئین نوترکیب کایمریک آنتی‌ژن محافظ و فاکتور کشنده باسیلوس آنتراسیس از روش امولسیون دوگانه تبخیر حلال استفاده شد. اندازه و پتانسیل زتای نانوذرات، بازده بارگذاری نانوذرات، الگوی رهایش پروتئین نوترکیب، تاثیر احتمالی روش تولید نانوذرات پلی‌لاکتیک اسید پلی‌اتیلن گلیکول (plapeg‌) بر روی ماندگاری پروتئین‌های نوترکیب بررسی شد. به منظور تولید آنتی‌بادی و بررسی پاسخ ایمنی، از موش‌های سوری به عنوان نمونه تست و شاهد استفاده شد.یافته‌ها: میانگین تیتر آنتی‌بادی تولیدی علیه پروتئین‌های کایمریک به صورت بارگذاری شده نسبت به آزاد، اختلاف معنی‌داری را نشان می‌دهد. اختلاف تیتر آنتی‌بادی بین گروه‌های یک بار تزریق بارگذاری شده و دو بار تزریق بارگذاری شده و آنتی‌ژن آزاد، معنی‌دار است و بیش‌ترین تیتر آنتی‌بادی، مربوط به دو بار تزریق بارگذاری شده است. هم‌چنین بین تزریق بارگذاری شده یک تزریق و آزاد، اختلاف معنی‌داری مشاهده گردید. این مطلب بیانگر این است که می‌توان با بارگذاری آنتی‌ژن‌های کایمریک در نانوذرات plapeg و یک بار تزریق (به جای چهار تزریق) میزان آنتی‌بادی بیش‌تری تولید نمود.نتیجه‌گیری: نتایج حاصل از این مطالعه نشان داد که دُمین چهار آنتی‌ژن محافظ و دُمین اول فاکتور کشنده باسیلوس آنتراسیس با یک‌دیگر ادغام‌ پذیرند و آنتی‌ژن فعالی را تولید می‌نماید. این آنتی‌ژن‌های کایمریک تولید شده (lfd1pa4)، فعال است و قادر به تحریک سیستم دفاعی حیوان آزمایشگاهی می‌باشد. هم‌چنین نانو حامل‌های حاوی آنتی‌ژن تولیدی با رهایش کنترل شده، می‌تواند سیستم ایمنی حیوان آزمایشگاهی را تحریک نماید.

Antibody titers of PEG-PLA block copolymer nanosphere containing chimeric recombinant protein of protective antigen and lethal factor of Bacillus anthracis

Introduction: To date, many vaccines have been developed for anthrax but not yet an ideal vaccine. In this study, chimeric protein containing domain 1 lethal factor and domain 4 protective antigens of Bacillus anthracis in copolymer nanocapsules were used to solve the problems caused by existing vaccines and to increase the efficiency of the proposed vaccine.Materials and Methods: In this experimental study, dual solvent evaporation method was used to produce nanocapsules containing chimeric recombinant protein of protective antigen and lethal factor of Bacillus anthracis. Zeta potential of nanoparticles, nanoparticle loading efficiency, recombinant protein release pattern, potential effect of poly (lactic acid) poly (ethylene glycol) nanoparticle (PLAPEG) production on the viability of recombinant proteins were investigated. Mice were used as test and control samples for antibody production and immune response evaluation.Results: The mean antibody titer produced against chimeric proteins loading was significantly different from that of free antigens. Correspondingly, the difference in antibody titer was significant between the groups of one and two times rsquo; injection of loading and free antigens and the most antibody titer was related to two times injections of loading antigens. In addition, there was a significant difference between one times injection of loading and the free antigens. This suggests that the loading chimeric antigen on PLAPEG nanoparticles and one time injection (instead of four times injections) could produce more antibodies.Conclusion: The results of this study showed that the domain 4 protective antigens and the domain 1 lethal factor of Bacillus anthracis could chimeric with each other and produced the active antigen. This chimeric antigen (LFD1PA4) is active and able to inducing the animal #39;s immune system. In addition, nanocarriers containing controlled release antigens can induce the immune system of the animal.