بررسی اثر اینترلوکین-27 بر فعالیت سلول‌های طبیعی کشنده مغز استخوان در بیماران مبتلا به لوسمی لنفوسیتی مزمن در شرایط آزمایشگاهی

هدف: نقص در عملکرد سلول‌های سیستم ایمنی از مهم‌ترین علل رشد و گسترش سلول‌های توموری بوده و استفاده از سایتوکاین‌های محرک سیستم ایمنی، از جمله درمان‌های جدید در بدخیمی‌های‌خونی می‌باشد. هدف از انجام این مطالعه بررسی اثر اینترلوکین ‌27‌ (il-27) بر‌ فعالیت سلول‌های کشنده ‌طبیعی (nk) مغز استخوان افراد مبتلا به لوسمی ‌لنفوسیتی ‌مزمن (cll) در شرایط آزمایشگاهی بود.مواد و روش‌ها: ابتدا ml10 آسپیره ‌مغز استخوان از 5 بیمار مبتلا‌به cll جمع‌آوری و سلول‌های تک‌هسته‌ای آن با استفاده از روش گرادیان فایکول جداسازی‌شده و سلول‌های nk با روش macs تخلیص شدند. سلول‌های تک هسته‌ای (bmcs) در محیط ‌کشت rpmi در حضور‌ و عدم‌حضورil-27 نوترکیب‌ انسانی (100 نانوگرم در میلی‌لیتر) به مدت 48 ساعت کشت شدند. میزان بیان cd69 بر روی سلول‌های nk تخلیص‌شده و bmcs با استفاده از فلوسایتومتری مورد‌ بررسی قرار‌ گرفت. سلول‌های nk تخلیص‌شده به‌عنوان سلول‌‌ کشنده با رده‌سلولی k562 به عنوان سلول هدف در سه نسبت سلول‌ کشنده (effector) به سلول ‌هدف (target) (e:t) معادل با 5:2.1، 5:1 و 10:1 مجاور و میزان مرگ‌ سلول‌های هدف با استفاده از annexin v/7aad بررسی‌شد.یافته‌ها: مطابق نتایج به‌دست‌آمده il-27 موجب افزایش بیان cd69 در سطح سلول‌های nk تخلیص شده، گردیده است (0.05=p)؛ در حالی‌که میزان بیان cd69 سلول‌های nk تخلیص‌ نشده (bmcs) در مجاورت با il-27 افزایش معناداری نشان ‌نداد (0.06=p). هم‌چنین نتایج تست‌کشندگی نشان‌ داد در ‌نسبت 10:1 میزان کشندگی سلول nk افزایش معناداری داشته ‌است (0.3=p)، اما در نسبت‌های 5:2.1 و 5:1 این تفاوت معنادار‌ نمی‌باشد.نتیجه‌گیری: il-27 می‌تواند موجب تقویت عملکرد سلول‌های nk مغز استخوان در cll شده و کشندگی آن‌ها را علیه سلول‌های ‌بدخیم افزایش دهد. حاصل دست‌آوردهای این مطالعه می‌تواند در مطالعات کارآزمایی ‌بالینی مورد استفاده قرار گیرد.

Effect of IL-27 on activity of bone marrow NK cells of patient with B-chronic lymphocytic leukemia in vitro

Introduction: Functional defect in immune cells is the prominent feature in hematological malignancies that lead to the expansion of tumor cells. Using immunostimulatory cytokines is one of the new therapeutic approaches. This study aimed to investigate the effect of IL-27 on the activity of bone marrowNK cells of chronic lymphocytic leukemia (CLL) patients in vitro.Materials and Methods: 10 ml of bone marrow aspirate samples were collected from 5 patients with CLL and isolated monocular cells using FicollHypaque density gradient. NK cells were then purified by MACS technique. The mononuclear cells were cultured in RPMI with or without recombinant human IL-27 (100ng/ml) for 48 hours. Expression of CD69 was assessed on purified and unpurified NK cells (BMCs) using flow cytometry. Also, purified NK cells were adjacent to the target cells as the K562 cell line in E:T ratios of 2.5:1, 5:1 and 10:1, then the target cell survival was assessed by flow cytometry using Annexin V/7AAD.Results: The levels of CD69 expression on purified NK cells increased in IL-27 treated group in compared to the control (P=0.05). However, the expression level of CD69 in unpurified NK cells did not significantly increase with IL-27 treatment (P=0.06). Moreover, in the ratio of E/T:10, the NK cell cytotoxicity rate increased significantly (P=0.03), but this difference was not significant in the E:T ratios of 2.5 and 5.Conclusion: IL-27 cytokine increased NK cell function and cytotoxic activity against malignant cells in CLL. The results of this study can be used in clinical trials in the future.