کلونینگ و تولید فرم مونومر استرپتاویدین نوترکیب و ارزیابی اتصال آن به بیوتین

هدف: استرپتاویدین پروتئینی هموتترامر است که تمایل اتصال بالای آن به بیوتین باعث شده در فرآیندهای بیوتکنولوژی و مطالعات سلولی کاربرد فراوانی داشته باشد. اما فرم تترامر آن در بعضی تداخل ایجاد می کند. بنابراین در این مطالعه با ایجاد جهش حذفی اقدام به تولید فرم مونومر استرپتاویدین گردید.مواد و روش ها: ابتدا توالی نوکلئوتیدی استرپتاویدین از سایت ncbi گرفته شد و بعد از اعمال جهش در توالی ژن مورد نظر به منظور بیان در باکتری e.coli بهینه و سنتز گردید. برای کلون کردن ژن از سویه e.coli dh5α و برای بیان ژن استرپتاویدین از سویه e.coli bl21 (de3) plyss استفاده شد. تخلیص پروتئین با کیت ni-nta انجام شد و توسط haba dye تمایل اتصال استرپتاویدین به بیوتین مورد سنجش قرار گرفت.یافته ها: فرم مونومر استرپتاویدین در میزبان بیانی e.coli bl21 (de3) plyss تولید و تخلیص گردید. استرپتاویدین مونومر نوترکیب دارای تمایل اتصال مناسب به بیوتین بود.نتیجه گیری: با ایجاد جهش در توالی پپتیدی استرپتاویدین می توان به فرم مونومر آن دست یافت که دارای تمایل اتصال مناسب به بیوتین باشد.