مهار موقت بیان ژن Vegfr2 با استفاده از Sirna اختصاصی در محیط کشت

مقدمه: استفاده از sirna برای خاموش‌سازی بیان ژن‌ها امروزه در حال گسترش است. از جمله اهداف این تکنولوژی؛ جلوگیری از بیان عامل رشد اندوتلیال عروقی است. مطالعه حاضر به‌منظور جلوگیری بیان گیرنده تیپ ii این عامل (vegfr-2: vascular endothelial growth factor receptor ii) با استفاده از sirnaی اختصاصی در محیط کشت صورت گرفته است.مواد و روش‌ها: ابتدا با استفاده از توالی ژن هدف، توالی‌های sirnaی اختصاصی علیه آن طراحی؛ blast و ساخته شد. از طرف دیگر cdna سلول huvec سنتز و با کمک پرایمر اختصاصی و pcr به میزان موردنیاز تکثیر شد و سپس در وکتور بیانی pefgp-n1 درج و تایید شد. پلاسمید ناقل حاصله با استفاده از لیپوفکتامین به سلول hela که فاقد بیان ژن هدف بود انتقال داده شد. میزان بیان  gfpدر وکتور اولیه و وکتور تراریخت شده در حضور و عدم حضور sirna اختصاصی مورد ارزیابی قرار گرفت و میزان مهار ژن از طریق ارزیابی کاهش فلورسانس سبز رنگ ناشی از gfp و rt-pcr مورد بررسی قرار گرفت.نتایج: نتایج حاصل از دو sirna به‌کار رفته بیانگر کاهش بیان ژن به‌ترتیب 56% و 62% در مقایسه با گروه کنترل بود (05/0p<).نتیجه‌گیری: sirnaی اختصاصی طراحی شده علیه vegfr-2 با استفاده از لیپوفکتامین به‌طور مناسب به‌داخل سلول منتقل و از بیان گیرنده به‌طور معنی‌دار جلوگیری نمود. در واقع با قطع مسیر پیام‌رسانی رگزایی، می‌تواند از پیدایش عروق جدید جلوگیری نماید لذا احتمالاً به‌عنوان یک عامل مناسب درمانی جدید در جلوگیری و یا کاهش رگزایی مطرح باشد.

In-vitro Knock Down of VEGFR2 Expression Using Specific siRNA in the Culture Medium

Introduction:The use of siRNAforsilencinggene expressionis expandingtoday. Knock down ofvascular endothelial growth factor is one of theobjectives ofthistechnology. In this study we aimed to inhibit the expression of receptor type II of VEGF (VEGFR-2) using specific siRNA in the culture medium.Methods: First, according to the target gene sequences, sequence of the specific siRNA were designed blasted and built. Using RT-PCR, cDNA of HUVEC was synthesized and PCR with specific primers was reproduced. PEFGP-N1 expression vector was cloned with target gene and confirmed. Then Hela cells which has not any expression of the target genes were transfected whit cloned pEGFP-N1 vector using lipofectamin. GFP expression rate in the Hela cellsContaining initial vector and cloned vector in presence and absence of specific siRNA was assessed. Through evaluation of gene inhibition, decreasing of green fluorescence from GFP, RT-PCR was investigated.Results: The results of the two used siRNA, indicate reduced gene expression 56% and 63% in comparison with the control group (Plt 0.05).Conclusion: Transfection of specific VEGFR-2 siRNA using lipofectamin significantly inhibits expression of receptor. In fact,it cancut thesignal transduction pathwayand preventsthe creation ofnewblood vessels. Therefore, probably it can act as a new treatment factor for prevention or reduction of neovascularization.