بهینه‌سازی روش فنول کلروفرم سیلیکا برای استخراج Dna از نمونه استخوان‌های قدیمی

مقدمه: استخراج dna از نمونه استخوان‌های قدیمی همواره با مشکلات زیادی همراه است. روش فنول کلروفرم سیلیکا یکی از روش‌هایی است که به‌طور معمول برای این منظور استفاده می‌شود. در این مطالعه هدف بررسی و بهینه‌سازی مراحل این روش است.مواد و روش‌ها: dna 62 نمونه استخوان (دارای عمر 3 تا 11 سال) ابتدا با روش فنول کلروفرم معمولی و سپس با تغییر بعضی پارامترها استخراج شد. dna حاصل در هشت منطقه str به نام‌های cd4, vwa, lpl, d5s818, d16s539, d13s317, f13, fes توسط واکنش pcr تکثیر شد و نتایج حاصل برروی ژل اکریلامید مقایسه شد.نتایج: میانگین بازدهی واکنش pcr، برای روش جدید و روش معمولی در هشت منطقه پلی‌مورفیک ذکر شده به‌ترتیب 75%، 78%، 81%، 76%، 85%، 71%، 89%، 86%و 64%، 39%، 70%، 49%، 68%، 76%، 71%، 28% بود. متوسط میزان dna حاصل از روش بهینه شده (در غلظت µl35 ذرات سیلیکا) و معمولی به‌ترتیب برابر µg/ml 5/267 با خلوص 12/1 و µg/ml 76/192 با خلوص 84/0 بود.نتیجه‌گیری: طبق یافته‌های این مطالعه به‌نظر می‌رسد تیمار طولانی‌تر با edta یکی از عوامل موثر حذف بهتر کلسیم باشد و همچنین غلظت مناسب ذرات محلول سیلیکا می‌تواند تاثیر مهمی در حذف مهار‌کننده‌های pcr داشته باشد.