کلون و بیان فوتوپروتیین اکورین با استفاده از دنباله اینتیین

زمینه: اینتیین (int) بخش‌های درونی پروتیین است که می‌تواند در طی فرایند پیرایش پروتیین، خود را از پروتیین نابالغ جداکند. این توالی برای جدا شدن، احتیاج به آنزیم یا کوفاکتور خاصی ندارد. از این توالی پروتیینی و ویژگی برش خود به خودی آن، در اثر اعمال تغییر دما، ph و یا القای تیولی در جهت تخلیص پروتیین استفاده می‌شود. مزیت این روش نسبت به بقیه روش‌های تخلیص پروتیین، عدم احتیاج به آنزیم‌های پروتیازی و مراحل حذف پروتیاز می‌باشد که این روش را از لحاظ اقتصادی حایز اهمیت می‌کند. در تحقیق حاضر فوتوپروتیین اکورین به‌صورت ملکولی با int هیبرید شده و میزان بیان آن مورد ارزیابی قرار گرفته است.مواد و روش‌ها: در این تحقیق ژن رمز کننده اکورین که در مطالعات قبلی درون وکتور pet21a کلون شده بود با استفاده از پرایمرها و آنزیم‌های محدودگر اختصاصی درون وکتور ptyb21، که حاوی دنباله int است، کلون گردید. سپس وکتور pty-aequorin حاصله به باکتری e.coli سویه بیانی er2566 انتقال داده شد و با تکنیک‌های الکتروفورز (electerophoresis)، وسترن بلات (western blot) و تعیین ترادف (sequencing)، صحت کلون‌ها بررسی گردید. یافته‌ها: ژن به رمز درآورنده فوتوپروتیین اکورین بین جایگاه های آنزیمی sapi و psti درون وکتور ptyb21 به‌صورت صحیح کلون گردید و بیان پروتیین هیبریدی اکورین- اینتیین با استفاده از روش‌های مرسوم تایید گردید.نتیجه‌گیری: ساخت سازه ژنی فوتوپروتیین اکورین، در حالت هیبریدی و متصل به int با استفاده از روش‌های ملکولی تایید شد. همچنین میزان بیان اکورین در حالت متصل شده با int، درصد بیان بیش از 25 درصد مجموعه پروتیین‌های سلولی را نشان می‌دهد