تولید ایمونوگلوبولین زرده تخم‌ مرغ (igy) علیه پروتئین نوترکیب tolc از باکتری شیگلا فلکسنری

زمینه: پیشرفت مقاومت آنتی‌بیوتیکی یک عامل نگران کننده جهانی برای مقابله با شیگلوزیس می‌باشد. توسعه افلاکس پمپ‌ها از جمله پمپ acrab−tolc موجب گسترش مقاومت آنتی‌بیوتیک در سویه‌های شیگلا فلکسنری شده است. هدف از این تحقیق تولید igy علیه ایمونوژن نوترکیب tolc و ارزیابی میزان اتصال آن به ایمونوژن نوترکیب بود.مواد و روش‌ها: پس از طراحی و سنتز سازه حاوی نواحی ایمونوژن پروتئین tolc، پلاسمید نوترکیب pet28a-tolc به سلول‌های مستعد (de3)e. coli bl21  ترانسفورم شد. بیان پروتئین نوترکیب با غلظت 1 میلی‌مولار iptg القا گردید. پروتئین نوترکیب به روش کروماتوگرافی میل ترکیبی با استفاده از رزین (ni-nta) nickel-nitrilotriacetic acid تخلیص و با وسترن بلاتینگ ارزیابی شد. ایمن‌سازی مرغ‌های نژاد لگهورن با 200 میکروگرم از پروتئین نوترکیب انجام شد. آنتی‌بادی مرغی به روش ترسیب با پلی اتیلن گلیکول (peg) استحصال و ارزیابی تیتر آنتی‌بادی در سرم و زرده تخم مرغ، در مرغ‌های ایمن شده در مقایسه با گروه کنترل به روش الایزا تعیین گردید.یافته‌ها: پروتئین نوترکیب tolc با وزن مولکولی 40 کیلودالتون و بازده بیانی 10 میلی‌گرم بر لیتر محیط کشت بیان شد. غلظت آنتی‌بادی مرغی تخلیص شده 9 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر از زرده تخم مرغ بود. نتایج تیتر آنتی‌بادی در سرم علیه پروتئین نوترکیب پس از تزریق سوم تا رقت 1 به 6400 معنی‌دار بود (0/05>p). در روش الایزا حداقل 7 نانوگرم از آنتی‌بادی به پروتئین نوترکیب واکنش نشان داد. نتیجه‌گیری: آنتی‌بادی‌های حاصل از ایمونوژن نوترکیب tolc می‌توانند به عنوان منبع ایمنی غیرفعال در بیماری ایجاد شده توسط شیگلا فلکسنری مورد بررسی قرار گیرند.

production of chicken egg yolk immuno-globulin (igy) against recombinant tolc pro-tein from shigella flexneri bacteria

background: growing antibiotic resistance is a global concern for the treatment of shigellosis. the development of efflux pumps such as the acrab-tolc pump has increased antibiotic resistance in shigella flexneri strains. the aim of this study was to produce igy against the recombinant immunogen tolc and evaluate the binding of the antibody to the recombinant immunogenmaterials and methods: a construct containing immunogen regions of tolc protein was designed and synthesized; then, the recombinant plasmid pet28a-tolc was transferred to e. coli bl21 (de3) competent cells. expression of the recombinant protein in e. coli was induced with 1 mm iptg. the recombinant protein was purified using affinity chromatography by nickel-nitrilotriacetic acid (ni-nta) resin and evaluated by western blotting. leghorn chickens were immunized with 200 micrograms of the recombinant protein. igy was purified using peg precipitation, and the antibody titer was determined in immunized chicken’s serum and egg yolk by elisa method compared to the control group. results: recombinant protein tolc was expressed with a molecular weight of 40 kda and an expression yield of 10 mg/l of the culture media. the igy concentration was determined to be 9 mg/ml of egg yolk. the antibody titer in serum against the recombinant protein after the third immunization was 1: 6400 (p<0.05). in the elisa method, at least seven nanograms of antibody reacted with the recombinant protein.conclusion: antibodies against tolc recombinant immunogen can be investigated as a source of passive immunity in the disease caused by shigella flexneri.