طراحی و کلونینگ ژن l1 بهینه شده ویروس پاپیلوما انسانی تیپ 18 در وکتور بیانی pcdna3 و ارزیابی بیان آن در سیستم یوکاریوتی

زمینه: واکسن‌ها نقش ویژه‌ای در مهار و کاهش میزان مرگ ومیر ناشی از بیماری های عفونی داشته‌اند. در این راستا dna واکسن ها با هدف سهولت تولید و کاهش خطرات ناشی از واکسن های سنتی ایجاد شده اند. ویروس پاپیلومای انسانی (hpv) به عنوان عامل ایجاد کننده سرطان دهانه رحم معرفی شده است. در این راستا پروتئین کپسید ویروس (l1) به منظور ایجاد واکسن های زیر واحدی و نیز dna واکسن مورد استفاده قرار گرفته است. هدف از این پژوهش تجربی طراحی و ساخت سازواره بیانی ژن l1 ویروس hpv 18 و بررسی بیان آن در سلول‌های یوکاریوتی می باشد. مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، ژن l1 ویروس hpv 18 پس از بهینه سازی و سنتز، در وکتور بیانی pcdna 3.1 hygro ساب کلون گردید. تائید کلونینگ با استفاده از آزمون colony pcr و واکنش هضم آنزیمی انجام شد. انتقال وکتور بیانی به سلول های hek293 با استفاده از واکنشگر turbofect انجام شد. پس از 72 ساعت، rna کل از سلول های ترانسفکت شده و سلول های کنترل استخراج شده و cdna ساخته شد. بررسی بیان ژن در سطح mrna در سلول ها با انجام pcr بر روی cdna انجام شد. یافته‌ها: نتایج نشان داد که بدنبال بهینه سازی توالی ژن l1، شاخص های cai و fop در سطح ایده آل افزایش یافت. کلونینگ ژن بهینه شده hpv 18-l1 در وکتور بیانی pcdna3 با استفاده از آزمون کلونی pcr و واکنش هضم آنزیمی با موفقیت تایید گردید و نتایج بیانگر تشکیل پلاسمید نوترکیب pcdna3.1-l1 است. متعاقباً بررسی بیان ژن l1 در سطح mrna نشان دهنده بیان موفقیت آمیز ژن l1 در سیستم یوکاریوتی می باشد. نتیجه‌گیری: نتایج حاصل از این تحقیق، کارایی وکتور بیانی ایجاد شده در بیان موثر ژن l1 در شرایط in vitro را نشان می دهد. این وکتور بیانی قابلیت استفاده به عنوان dna واکسن در مطالعات آینده در شرایط in vivo را دارا می‌باشد.

design and cloning of the optimized l1 gene from human papilloma virus 18 into the expression vector pcdna3 and evaluating its expression in a eukaryotic system

background: vaccines have played a special role in controlling and reducing mortality from infectious diseases. in this regard, dna vaccines were developed to ease the production and reduce the risks of traditional vaccines. human papillomavirus (hpv) has been introduced as the causing agent of cervical cancer. the capsid protein (l1) of hpv has been used to produce subunit and dna vaccines. the aim of this experimental research is to design and construct the l1 expression system of hpv 18 and to investigate its expression in eukaryotic cells.method and materials: in this experimental study, the l1 gene of hpv 18 was subcloned in the expression vector pcdna 3.1 hygro after optimization and synthesis. cloning was confirmed through colony pcr test and enzyme digestion reaction. the expression vector was transfected into hek293 cells using the turbofect reagent. after 72 hours, total rna was extracted from transfected cells and control cells and cdna was synthesized. gene expression was examined at the mrna level in cells by performing pcr on cdna.results: the results showed that following the optimization of the l1 gene sequence, the cai and fop indices increased to an ideal level. the cloning of the optimized hpv 18-l1 gene in the pcdna3 expression vector was successfully confirmed by colony pcr test and enzyme digestion reaction, and the results indicate the production of recombinant plasmid pcdna3.1-l1. finally, the evaluation of the l1 gene at the mrna expression level showed the successful expression of the l1 gene in the eukaryotic system.conclusion: the results of this research show the effectiveness of the constructed expression vector in the effective expression of the l1 gene in vitro. this expression vector can be used as a dna vaccine in future studies.