طراحی، تولید و ارزیابی وایروزوم از ویروس آنفلوانزا ساب تایپ h1n1

زمینه: در دو دهه گذشته، اولین نسل از وایروزوم‌های آنفلوانزا گسترش پیدا کرد. وایروزوم‌های آنفلوانزا به‌دلیل کاربرد آن‌ها در زمینه‌های مختلف پزشکی به‌عنوان ابزاری نوین در برنامه‌های ساخت واکسن و ایمونوتراپی به حساب می‌آیند. هدف از مطالعه حاضر، ساخت وایروزوم کاتیونیک مشتق شده از ویروس آنفلوانزا با استفاده از دترجنت با قابلیت دیالیز (dcpc) و لیپید کاتیونیک (dotap) در شرایط آزمایشگاهی می باشد.مواد و روش‌ها: ویروس آنفلوانزا سویه (h1n1)a/puerto rico/34.8 در رده سلولی اپیتلیال کلیه سگ سانان تکثیر داده شد. پوشش ویروس آنفلوانزا با استفاده از dcpc به‌عنوان یک دترجنت حل گردید و با استفاده از دیالیز، این دترجنت حذف شده و با افزودن لیپید کاتیونیک dotap، وایروزوم کاتیونیک سنتز شد. میزان سمیت سلولی وایروزوم سنتز شده با روش mtt مورد ارزیابی قرار گرفت و حضور پروتئین های هماگلوتنین و نورآمینیداز با استفاده sdspage مورد بررسی قرار گرفت. مورفولوژی وایروزوم ساخته شده از طریق میکروسکوپ عبوری بررسی شد.یافته‌ها: غلظت نهایی وایروزوم ساخته شده، 1.5 میلی‌گرم در میلی‌لیتر بود. با استفاده از sdspage، حضور پروتئین های هماگلوتینین و نورآمینیداز تایید شد. همچنین در مقایسه با گروه کنترل، سایتوتوکسیسیته پس از 48 ساعت از تیمار با غلظت‌های مختلف وایروزوم کاهش معنی‌داری داشت (p<0/05 ).نتیجه‌گیری: استفاده از دترجنت dcpc و همچنین لیپید کاتیونیک dotap یک روش موثر در بازآرایی پوشش ویروس آنفلوانزا بدون ایجاد تغییرات در گلیکوپروتئین‌های سطحی ویروس می‌باشد. روش به کار رفته در تحقیق حاضر برای تولید وایروزوم، پتانسیل مناسبی در برنامه های طراحی واکسن آنفلوانزا در آینده خواهد داشت.

Design, Production, and Evaluation of Virosomes from H1N1 Influenza Virus

Background: The last two decades witnessed the spread of the first generation of influenza viruses. Influenza virosomes are promising tools in vaccine and immunotherapy programs because of their applications in various medical fields. The aim of the present study was to construct cationic virosomes derived frominfluenza virus using dialyzable detergent (DCPC) and cationic lipid (DOTAP) in vitro.Materials and Methods: Influenza A / Puerto Rico / 34.8 (H1N1) strain was propagated in MDCK cell line. The influenza virus envelope was dissolved using DCPC as a dialyzable detergent, and finally it was removed by dialysis and the cationic virosome was synthesized through adding cationic lipid (DOTAP). Cytotoxicity and presence of HA and NA proteins were evaluated by cell viability assay (MTT assay) and sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE), respectively. Also, macroscopic and morphology studies of virosomes were performed by transmission electron microscopy (TEM).Results: The final concentration of virosomes was 1.5 mg/ml. The presence of HA and NA proteins was confirmed by SDSPAGE. Cell survival was significantly decreased after 48 hours of treatment withdifferent concentrations of cationic virosomes (P<0.05).Conclusion: The use of a detergent (DCPC) and also a cationic lipid (DOTAP) is an effective procedure for reconstruction of influenza virus envelope without any alteration in surface glycoproteins (HA, NA). The methoed used in the present study for producing influenza virosome will be a promising candidate fordeveloping influenza vaccines.