مقایسۀ وکتورهای بیانی pet32a و pet25b در بیان توالی پلی اپیتوپی سنتز شده از آنتی‌ژن‌های انگل لیشمانیا اینفانتوم

زمینه: امروزه از روش‌های مولکولی در تشخیص بیماری‌ها، تولید واکسن‌ها، داروها و تولید پروتئین‌های نوترکیب استفاده می‌شود، لذا یکی از مراحل مهم انتخاب وکتور مناسب برای کلون و بیان ژن‌های هدف است. از آنجا که بیان پلی‌ژن‌های سنتتیک یا اصطلاحاً آنتی‌ژن‌های کایمریک با وزن مولکولی بالا نیاز به شرایط ویژه‌ای دارد، مطالعۀ حاضر به هدف ارزیابی میزان اهمیت نوع وکتور برای بیان اینگونه آنتی‌ژن‌ها انجام شد. مواد و روش‌ها: توالی 1250 جفت بازی متشکل از اپی‌توپ‌های هشت آنتی ژن مهم انگل لیشمانیا اینفانتوم طراحی و توسط شرکت بیوماتیک (کانادا) سنتز شد، توالی به‌صورت جداگانه درون دو وکتور بیانی pet25b و pet32a کلون و سپس به باکتری (de3) e.coli bl21ترانسفورم و تحت شرایط مشابه بیان شدند. لیزابه باکتری توسط sds page بررسی و با وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت.یافته‌ها: نتایج sds page و وسترن بلات نشان داد که تولید پروتئین نوترکیب کامل و بی‌نقص توسط وکتور pet25b موفقیت‌آمیز نبوده است. این در حالی بود که پروتئین نوترکیب حاصل از بیان توالی پلی‌اپی‌توپی مذکور در وکتور pet32a به‌صورت موفقیت‌آمیزی تولید و تائید گردید.نتیجه‌گیری: با توجه به بیان موفقیت‌آمیز توالی پلی‌اپی‌توپی درون وکتور pet32a و شناسایی و تائید پروتئین مربوطه، از طرفی عدم موفقیت حصول پروتئین در وکتورpet25b نشان داد که در مورد بیان برخی توالی‌های موزائیکی خاص کم بودن ویژگی حلالیت ممکن است به‌طور کلی دستیابی به پروتئین را با مشکل مواجه کند بنابراین انتخاب نوع وکتور بیانی باید با دقت بیشتری صورت گیرد.

Comparative Evaluation of Expression Vectors (pET32a and pET25b) in Expression of Polyepitopic Sequence Synthesized from Leishmania infantum Antigens

Background: Molecular methods are nowadays used to diagnose diseases, produce vaccines, drugs and recombinant proteins. Therefore, one of the important steps in these procedures is selecting the appropriate vector for cloning and expression of the target genes. Because the expression of synthetic polygenes or socalled chimeric antigens with high molecular weight requires special conditions, the aim of this study was to evaluate the importance of vector type for expression of such antigens.Materials and Methods: The 1250bp sequence consisting of epitopes from eight important antigens of Leishmania infantum parasite was designed and synthesized by Biomatic Company (Cambridge, Canada). The sequence was cloned separately in two expression vectors pET25b and pET32a and then transformed into E.coli BL21 (DE3) and expressed under similar appropriate conditions. Bacterial lysates were analyzed by SDS PAGE and evaluated by Western blotting.Results: of SDS PAGE and Western blot analysis showed that intact recombinant protein production by pET25b vector was not successful. However, the recombinant protein resulted from the expression of the aforementioned polyepitope in pET32a vector was successfully produced and confirmed. Conclusion: According to the successful expression confirmation of the polyepitopic sequence within the pET32a vector and furthermore the failure to obtain protein in the pET25b vector showed that in the case of some specific mosaic sequences expression, protein isolation will be difficult because of low solubility. So, the expression vector choose should be made more carefully.