تشخیص مولکولی پروویروس htlv-1 از dna آزاد شده از سلول‌ها در پلاسما، در موارد عدم دسترسی به dna ژنومی سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی

سابقه و هدف ویروس لنفوتروپیک تیپ i انسانی، عمدتاً لنفوسیت ها را آلوده می کند. برای تشخیص آین ویروس ، عمدتاً سلول‌های هسته دار مورد ارزیابی قرار می‌گیرد. با توجه به طول عمر کوتاه سلول ها، جمع‌آوری نمونه یک چالش به حساب می آید. هدف از این مطالعه، بررسی حضور ویروس htlv-1 در dna ژنومی آزاد شده از سلول ها در پلاسما و تعیین بار ویروسی آن در اهداکنندگان خون وسترن بلات مثبت بود.مواد و روش‌ها در این مطالعه توصیفی، 30 اهداکننده ناقل ویروس htlv-1 وسترن بلات مثبت بررسی شدند. با استفاده از کیت استخراج، dna ژنومی از پلاسما،  و pbmc جداسازی شده با فایکول، استخراج گردید. حضور ویروس htlv-1 با آزمایش مولکولی  nested pcr تایید و جهت تعیین بار ویروس از آزمایش کمی real-time sybergreen pcr استفاده گردید. یافته‌ها میانگین سنی افراد برابر با 5/13 ± 9/42 سال بود. 3/93% از افراد مذکر و 6/6% مونث بودند. ناحیه ژنی ltr به روش nested pcr در80% از نمونه های پلاسما و 100% نمونه های pbmc شناسایی گردید. میانه لود ویروس در پلاسما برابر با copies/µl 90/1 و میانه لود ویروس در pbmc برابر با pbmc 106/ copies 20 بود. نتیجه گیریجهت تشخیص مولکولی ویروس htlv-1 ، می‌توان پروویروس htlv-1 را در dna آزاد شده از سلول‌ها در پلاسما، در مواردی که سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی در دسترس نمی‌باشد، مورد استفاده قرار داد. هم‌چنین دیده شد که میزان بار ویروس در پلاسمای ناقلین بدون علامت نسبت به pbmc حدود 10 برابر کمتر می باشد. 

molecular detection of htlv-1 provirus from dna released from cells in plasma, in cases of lack of access to genomic dna of peripheral blood mononuclear cells

background and objectives human lymphotropic virus type i mainly infects lymphocytes. for the detection of this virus, mainly nucleated cells are evaluated. due to the short longevity of cells, sample collection is a challenge. the purpose of the study was to investigate the presence of htlv-1 virus in genomic dna released from cells in plasma and to determine its viral load in western blot-positive blood donors.materials and methodsin this descriptive study, 30 htlv-1 positive western blot donors were evaluated. using an extraction kit, genomic dna was extracted from plasma and isolated pbmc using ficol. a nested pcr test was used to confirm the presence of htlv-1 virus. a real-time pcr quantitative test by sybergreen method was used to determine the amount of virus load.resultsthe average age of subjects was 42.9 ± 13.5 years; 93.3% of them were male and 6.6% female. ltr gene region was detected by nested pcr method in 80% of plasma and 100% of pbmc samples. the median viral loads in plasma and pbmc were 1.90 copies/µl and 20 copies/106 pbmc, respectively.conclusions  to detect the htlv-1 virus by molecular method, the htlv-1 provirus  dna released from cells, in the plasma can be used when peripheral blood mononuclear cells are unavailable. it has also been observed that the virus load in the plasma of asymptomatic carriers is approximately 10 times lower than in pbmc.