بیان فاکتور سلول بنیادی نوترکیب متصل به زیپ‌لوسین

سابقه و هدف فاکتور سلول بنیادی، یک سیتوکاین خونی است که از طریق تاثیر بر روی سلول‌های خونساز در تمایز سلول‌های پیش‌ساز خونی، بقا، تکثیر و تمایز ماست‌سل و هم‌چنین افزایش تکثیر و تهاجم سلول‌های توموری نقش ایفا می‌کند. زیپ ‌لوسین به صورت نوترکیب یا طبیعی با تشکیل همودایمر در ساختار خود، باعث همو و یا هترو دایمریزاسیون انواع بسیاری از پروتئین‌های متصل به خود شده و می‌تواند اثری مطلوب در عملکرد یا پایداری آن‌ها داشته باشد. مطالعه انجام شده سعی در دایمریزاسیون فاکتور سلول‌های بنیادی نوترکیب و زیپ‌لوسین و بیان آن دارد. مواد و روش‌هامطالعه حاضر از نوع تجربی بود. شامل بخش طراحی پروتئین نوترکیب توسط نرم‌افزارهای بیوانفورماتیک و بخش آزمایشگاهی می‌باشد. شاخص‌های مورد توجه در بخش طراحی از جمله ساختارهای پروتئینی توسط نرم‌افزارهای مختلف شامل psipred وchimera  و پایداری پروتئین نوترکیب توسط rampage بررسی شد. پس از تعیین جایگاه‌های برش آنزیمی توسط nebcutter و بهینه‌سازی برای باکتری اریگامی توسط optimizer ، ساخت توالی انجام شد. در ادامه کلون آن در باکتری top10 و بیان پروتئین در باکتری اریگامی انجام گرفت.یافته‌ها نتایج حاصل از مطالعه‌های بیوانفورماتیک روی پروتئین نوترکیب leucine zipper / scf، در برگیرنده شاخص‌های لازم جهت ساختار صحیح پروتئین و دارای امتیازی بالا از لحاظ پایداری در سلول زنده بود و در ادامه نتایج حاصل از بخش تجربی نشان از کلون و بیان موفق آن داشت.نتیجه گیری نتایج این مطالعه، همسانه‌سازی و بیان موفق پروتئین نوترکیب leucine zipper/scf در میزبان اریگامی را تائید نمود.

expression of recombinant stem cell factor fused with leucine zipper

abstractbackground and objectivesstem cell factor (scf) is a blood cytokine that plays an important role in the differentiation of hematopoietic progenitor cells, as well as survival, proliferation, and differentiation of mast cells. furthermore, it can enhance tumor cell proliferation and invasion. recombinant or natural form of leucine zipper can cause homo- or heterodimerization of many types of proteins which are attached to it and have a favorable effect on their function or stability. the present study investigates the expression of leucine zipper-bound scf. materials and methodsthis experimental study consists of designing a recombinant protein by bioinformatic softwares and the laboratory part of the study. the indices of interest for designing of the protein structures were analysed by various softwares including psipred and chimera and the recombinant protein stability by rampage. the sequence synthesis was performed after determination of the enzymatic cleavage sites with nebcutter. then, codon optimization for origami was done with optimizer. cloning in top10 and the protein expression in origami were performed. resultsthe results of bioinformatics studies on the leucine zipper/scf recombinant protein included the necessary criteria for the possible native structure of the protein and the high score for viability in the living cell. furthermore, the results of the experimental section showed successful cloning and expression. conclusions  in the present study, the results indicated the successful cloning and expression of the recombinant leucine zipper/scf protein.