عوامل تاثیرگذاردرایمنی‌زایی علیه آنتی ‌ژن گروه خونی kell در محیط کشت

سابقه و هدف ایمنی‌زایی در آزمایشگاه، امکان‌پذیر می‌باشد. در این روش سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی، جداسازی شده و با فاکتورهای لازم جهت ایمنی‌زایی در محیط کشت مواجه می‌شوند. در این مطالعه، به دنبال شناخت فاکتورهای مختلف و عوامل دخیل در فرآیند ایمنی‌زایی لنفوسیت‌های b در آزمایشگاه به عنوان مرحله مقدماتی در ایجاد آنتی‌بادی بر علیه آنتی‌ژن گروه خونی kell بودیم. مواد و روش‌هادر یک مطالعه تجربی، آنتی‌ژن kell از کیسه‌های خون کامل kell+ جداسازی و تخلیص شد. سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی از کیسه‌های خون کامل kell با استفاده از روش گرادیان دانسیته، جداسازی شدند و پس از مواجهه با ال لوسیل ال لوسین متیل استر، با کلیه فاکتورهای لازم جهت ایمنی‌زایی در محیط کشت با غلظت مناسب از آنتی‌ژن، ادجوانت و سیتوکاین‌های اینترلوکین 4 و اینترفرون گاما مواجه گردیدند. پس از 117 روز، سوپ‌روبی سلول‌ها از نظر تولید آنتی‌بادی با روش حساس الایزا بررسی شدند. یافته‌هامطلوب‌ترین شرایط کشت به منظور ایجاد ایمنی‌زایی و تولید آنتی‌بادی اختصاصی antikell ، مواجهه سلول‌های تک هسته‌ای با غلظت 0.25 میلی‌مولار llme و به کارگیری 1000- 500 نانوگرم در میلی‌لیتر آنتی‌ژن kell به همراه 10 میکرولیتر mlc (mix lymphocyte culture) است. میانگین جذب نوری در طول موج 450 نانومتر که بیانگر تولید آنتی‌بادی اختصاصی علیه آنتی‌ژن kell می‌باشد، در این حالت 0.03 ± 2.052 به ‌دست آمد.نتیجه گیریبر اساس مطالعه انجام شده، انجام ایمنی‌زایی در محیط کشت علیه آنتی‌ژن kell امکان‌پذیر می‌باشد و می‌توان با به کارگیری عوامل مختلف، تحریک سلول‌های تولیدکننده antikell در محیط کشت را بهینه سازی کرد.

Evaluation of effective factors during an in Vitro immunization against Kell blood group antigen

AbstractBackground and Objectivesinvitro immunization is one of the common methods of immunization as a preliminary step in the production of Monoclonal Antibodies. In this method, peripheral blood mononuclear cells (PBMC) are isolated and incubated in culture medium with necessary factors for immunization. Antigenspecific B lymphocytes proliferate and differentiate into cells that secrete specific antibodies. In the current study, we aimed to identify various factors and contributing elements on B cell Invitro immunization process for the generation of antibody against Kell blood group antigen.Materials and MethodsIn this experimental study, Kell antigen was purified from Kell+ whole blood. Peripheral blood mononuclear cells were isolated using a density gradient approach from Kell whole blood bag. After exposure to LLeucylLleucine methyl ester (LLME), they were incubated with other required factors for immunization, including antigen (5001000 ng/ml), adjuvant (520 mg/ml), and cytokines (9.5 pg/ml). After 711 days, cells supernatant was evaluated using a sensitive method, ELISA, for antibody production.ResultsIt was observed that the most desirable culture condition for immunization and further production of specific antiKell antibody from mononuclear cells was 0.25 mM concentration of LLME employing 5001000 ng of Kell antigens and 10 microliter MLC. In the mentioned condition, the optical density was read at 450 nm as 2.052 ± 0.03, which was the representative of production of specific antiKell antibody.Conclusions Based on the study, immunization in culture medium against Kell antigen can be done. By employing different factors, the production of antiKell producing cells in culture condition can be optimized.