عوامل موثر در بهینگی ایمونیزاسیون جهت دستیابی به آنتی بادی‌ علیه آنتی‌ژن rhd در محیط کشت

سابقه و هدف آنتی‌بادی علیه آنتی‌ژن rhd در طب انتقال خون و بالین از اهمیت ویژه‌ای برخوردار می‌باشد. لذا در این مطالعه به بررسی عوامل موثر در بهینگی ایمونیزاسیون جهت دستیابی به لنفوسیت ایمونیزه شده تولیدکننده آنتی‌بادی پرداخته شده تا در محیط آزمایشگاهی به آنتی‌بادی علیه آنتی‌ژن rhd دست یافته شود. مواد و روش‌هادر یک مطالعه تجربی، لنفوسیت‌های خون محیطی به روش فایکول از کیسه‌های خون کامل o منفی جداسازی شدند. سپس این لنفوسیت‌ها با ال‌لوسین متیل استر تیمار شده و در پلیت کشت سلولی با آنتی‌ژن محلول و ذره‌ای rhd ، اینترفرون گاما، اینترلوکین4 و cpgodn به مدت یک هفته در دمای 37 درجه سانتی ‌گراد مواجه شدند. پس از این مدت انکوباسیون به منظور ارزیابی تولید آنتی‌بادی از لنفوسیت‌ها بر روی سوپرناتانت حاصل از محیط کشت مواجه سلولی با روش الایزا انجام شد.  یافته‌هااستفاده از اینترفرون گاما، ترکیب آن با اینترلوکین-4 و cpgodn به عنوان عوامل بهینه‌کننده جهت تولید آنتی‌بادی از لنفوسیت‌های جدا شده به روش فایکول در ایمونیزاسیون آزمایشگاهی شناخته شدند(به ترتیب با تولید آنتی‌بادی با غلظت‌های 831/36 ± 851/75 ، 293/31 ± 82/195 و24/814 ± 66/134 نانوگرم در میلی‌لیتر در 10 مواجه صورت گرفته).   نتیجه گیریاستفاده از عوامل بهینه کننده ایمونیزاسیون نقش موثری بر تولید آنتی‌بادی علیه آنتی‌ژن rhd در محیط آزمایشگاهی دارند.

Evaluation of effective factors in the optimization of immunization to achieve antibodies against RhD antigen in culture medium

AbstractBackground and ObjectivesAntibody against RhD antigen is important in blood transfusion and clinical medicine. Therefore, in this study, the effective factors in the optimization of in vitro immunization to achieve immunized lymphocytes that produce antibodies were evaluated to obtain antibodies against RhD antigen in the culture medium.Materials and MethodsIn an experimental study peripheral blood mononuclear cells were isolated from O-Negative whole blood bags using the Ficoll method. These cells were treated with L-leucyl-L-leucine methyl ester (LLME) and were exposed to soluble and particulate RhD antigen, interferon-gamma (IFN-γ), interleukin-4 (IL-4) and CpGODN in a culture plate at 37°C for one week. After this period of incubation, in order to evaluate the production of antibodies from lymphocytes on the supernatant obtained from the culture medium, ELISA assay was performed.ResultsThe use of IFN-γ, IFN-γ + IL-4 and IFN-γ + CpGODN was identified as the most optimal factors for the production of antibodies in an in vitro immunization (by producing antibodies with concentrations of 75.851 ± 36.831, 82.195 ± 31.293, and 66.134 ± 24.814 ngrml   in 10 exposures).Conclusions  The use of immunization optimization agents, has an effective role in the production of antibodies against RhD antigen in the in vitro culture.