بهینه‌سازی الزامات سنجش فعالیت ضد کمپلمانی به منظور کنترل کیفی محصول ایمونوگلوبولین: یک مطالعه ایرانی در مقیاس پایلوت

سابقه و هدف یکی از عوارض جانبی تجویز ایمونوگلوبولین، فعال شدن سیستم کمپلمان است که با غلظت بالای تجمعات و پلیمرهای بزرگ در فرآیند تولید ارتباط دارد. سنجش فعالیت آنتی کمپلمانی(aca) در کنترل کیفیت دارویی اهمیت ویژه ای دارد و معیاری برای فعال شدن خود به خودی سیستم کمپلمان در فرآورده های ایمونوگلوبولینی تهیه شده از پلاسمای انسانی می باشد که بر اساس روش مرجع و طبق الزامات فارماکوپه انجام می شود.  مواد و روش‌هادر یک مطالعه تجربی، ابتدا آزمون aca براساس فارماکوپه اروپا راه‌اندازی و سپس aca در دو محصول متفاوت ایمونوگلوبولینی به دست آمده از روش تغییر یافته کوهن، به نام روش الف و یا روش ب، اندازه‌گیری و مقایسه شد. اندازه گیری بر اساس توانایی ایمونوگلوبولین برای اتصال غیراختصاصی به کمپلمان و جلوگیری از لیز گلبول های قرمز حساس شده گوسفند می باشد. بنابراین ایمونوگلوبولین با کمپلمان خوکچه هندی انکوبه و سپس باقی‌مانده کمپلمان تیتر و به صورت درصد بیان گردید. یافته‌هامقادیر aca در دو محصول(روش الف و یا روش ب) در طی دو روز متوالی و هر روز هشت بار تکرار، به ترتیب ch50/mg protein 0.08 ± 0.486 و 0.07 ± 0.466 در مقایسه با ivig تجاری(0.07 ± 0.486) تعیین شد. طبق فارماکوپه اروپا، مقدار مجاز aca در ivig، ≤ 1 ch50 ⁄mg igg تعریف شده است.نتیجه گیریاندازه‌گیری‌های کمی و کیفی ایمونوگلوبولین به همان اندازه تحقیق و توسعه در فرآیندهای پالایش پلاسما ارزشمند است. با راه اندازی آزمون aca ، تجزیه و تحلیل aca در طول فرآیند تولید و نیز در مراحل اعتبارسنجی فرآورده های ایمونوگلوبولینی امکان پذیر شده است.

Improvement of anticomplementary activity assay for the quality control of immunoglobulin product: an Iranian pilot scale study

AbstractBackground and ObjectivesOne of the side effects of immunoglobulin administration is the activation of the complement system related to the high concentration of aggregates/large polymers in the production process. Measuring anticomplementary activity (ACA) is important in pharmaceutical quality control and is a criterion of spontaneous activation of complement system in immunoglobulin products prepared from human plasma.Materials and MethodsIn this experimental study, ACA was established based on the European Pharmacopoeia (EP) and ACA was measured and compared in two immunoglobulin products obtained by two modified Cohn’s methods A or B. The measurement is based on the ability of immunoglobulin for binding to complement and prevent the lysis of sensitized sheep red blood cells (SRBC). Therefore, immunoglobulin was incubated with guinea pig complement and then the remaining complement was titrated by CH50 method and expressed as a percentage.ResultsACA values in two products in the two methods of A and B and in two consecutive days and eight times each day were determined to be 0.486 ± 0.08 and 0.466 ± 0.07 CH50/mg protein, respectively; compared to commercial IVIG (Biotest Company) that was 0.486 ± 0.07. ACA activity was measured as less than ≤ 1 CH50 ⁄mg IgG, which was in accordance with the requirements of the pharmacopoeia.Conclusions  Quantitative and qualitative immunoglobulin measurements are as valuable as research and development in plasma purification processes. With the launch of the ACA test, ACA analysis has become possible during the production process as well as in the validation stages of immunoglobulin products.