مقایسه دو روش mtt و تریپان بلو در تعیین بقای رده سلولی vero در آلودگی با hsv-1

سابقه و هدف ارزیابی بقای سلولی در مطالعه‌های سلولی مهم است و نتیجه حاصله برای کاربرد ماده مورد آزمایش تعیین‌کننده است. امروزه از روش‌های مختلفی برای ارزیابی بقای سلولی استفاده می‌گردد و وجود همبستگی بین روش‌ها دارای اهمیت است. در این مطالعه، از سل لاینvero برای بررسی اثرات ویروس hsv1 بر بقای سلولی استفاده شد. بقای سلولی پس از آلودگی با hsv1 با استفاده از روش‌های حساس رنگ‌سنجی mtt و تریپان‌بلو بر روی سل لاین vero مورد بررسی قرار گرفت.مواد و روش‌هامطالعه کیفی انجام پذیرفته بر روی رده سلولی vero آلوده به ویروس hsv1 با رقت های لگاریتمی طی مدت 24 ساعت در محیط dmem حاوی 2% سرم جنین گاوی انجام گرفت و سپس زنده‌مانی سلولی توسط روش‌های رنگ سنجیmtt و تریپان بلو در رقت های 110 تا 510 و فواصل زمانی 0و 4 و8 و 18 و 24 ساعت بررسی شد و درصد بقا جهت رسم منحنی بقای سنجش استفاده گردید.یافته‌هارقت‌های مختلف ویروسی جهت تعیین دوز 50 درصد آلودگی tcid50 سلول با ویروس hsv1 با میکروسکوپ اینورت انجام شد. هم چنین داروی آسیکلویر با غلظت 50 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر به عنوان کنترل با روش‌های mtt و تریپان‌بلو، مقایسه شد. نتایج تحلیل رگرسیون بقای سلولی، نشان داد؛ همبستگی خطی، مثبت و معنادار بین روش‌ها مشاهده شده است یعنی بین روش‌های mtt و تریپان‌بلو همبستگی وجود داشت (p< 0.001, r = 0.9).نتیجه گیرینتایج نشان دادند، هر دو روش برای تعیین بقای سلولی قابل استفاده بوده و نتایج روش تریپان‌بلو قابل تایید با روش mtt می‌باشد.

Comparison of MTT and Trypan Blue methods in determining the survival of Vero cell line in HSV-1 infection

AbstractBackground and ObjectivesEvaluation of cell survival is important in cellular studies and the result is decisive for the application of the test substance. Different methods are used to evaluate cell survival and the correlation between methods is important. Here, Vero cell line was used to evaluate the effects of HSV1 virus on cell survival. Cell survival after HSV1 infection using sensitive colorimetric methods of 3, 4, 5dimethylthiazole2yl, 2, 5diphenyltetrazolium bromide (MTT), and Trypan Blue on Vero cell line was examined. Materials and MethodsA qualitative study was performed on Vero cell line infected with HSV1 virus with logarithmic dilutions101 to 105 dilutions and time intervals of 0, 4, 8, 18 and 24 hours and the s in DMEM containing 2% Fetal bovine serum (FBS). Then cell viability by MTT and Trypan tests was examined . The survival percentage was used to plot the survival curve of the assays. ResultsDifferent viral dilutions were used to determine the infectious dose of 50% (TCID50) of HSV1virus with invert microscope. Acyclovir at a concentration of 50 mg/mL was compared as drug control for MTT and Trypan Blue. The results of regression analysis showed cell survival. Linear, positive and significant correlation was observed between the methods that showed a correlation between MTT and Trypan Blue methods (p< 0.001, r = 0.9( Conclusions The results showed that both methods can be used to determine cell survival and the results of MTT can be confirmed by Trypan Blue method.