روش اصلاح شده pcr-rflp برای تشخیص جهش jak2 v617f در بیماران مبتلا به نئوپلاسم‌های میلوپرولیفراتیو

سابقه و هدف نئوپلاسم های میلوپرولیفراتیو، از جمله بدخیمی های خونی هستند که علایم بالینی بسیار متغیری دارند. تقسیم بندی بیماران میلوپرولیفراتیو به دو گروه دارای کروموزوم فیلادلفیا(ph+) و فاقد آن(ph) می باشد. در گروه ph ، بیماری های پلی سایتمی ورا، ترومبوسایتمی اساسی، میلوفیبروز اولیه و دیگر بیماری های نادر قرار می گیرد. این گروه از بیماران دارای جهش jak2 v617f می باشند که با درصدهای مختلف دیده می شود. هدف از این مطالعه، اجرای روش اصلاح شده pcr-rflp برای تشخیص جهشjak2 v617f در بیماران مبتلا به نئوپلاسم های میلوپرولیفراتیو بود.مواد و روش هادر این مطالعه مقطعی، 47 بیمار با درخواست آزمایش jak2 v617f ، مورد بررسی قرار گرفتند. برای تمامی نمونه ها آزمایش تشخیصی jak2 v617f با استفاده از روش استاندارد arms taqman probe انجام شد. جهت تایید نهایی، برخی از نمونه ها مورد توالی یابی ژنی قرار گرفتند. برای شناسایی ناحیه جهش با استفاده از روش pcr-rflp ، آغازگر های اختصاصی و آنزیم bsaxi استفاده شد. با توجه به این که در این مطالعه نمونه های منفی و مثبت به همراه یک روش استاندارد برای تعیین جهش وجود داشت، محاسبه حساسیت و ویژگی این روش 100% تعیین گردید. تحلیل نتایج توسط آزمون t انجام شد. یافته هانتایج pcr-rflp جهش jak2 v617f برای تمامی نمونه ها کاملاً مشابه و منطبق با نتایج روش های استانداردarms taqman probe و تعیین توالی بود.نتیجه گیریروش pcr-rflp دارای حساسیت تشخیصی قابل مقایسه ای با روش های real time pcr و تعیین توالی بود. مزیت این روش اصلاح شده، توانایی آن در افتراق انواع هموزیگوت و هتروزیگوت بیماران، وجود کنترل داخلی برای عملکرد آنزیم و هم چنین سهولت و صرفه اقتصادی آن است.

Modified PCR-RFLP for detection of JAK2V617F mutation in patients with myeloproliferative neoplasm

AbstractBackground and ObjectivesChronic myeloproliferative neoplasms (MPNs) are clonal hematopoietic stem cell disorders. They are heterogeneous in symptoms and mainly consist of Philadelphia chromosome positive (Ph+) and negative (Ph). The Ph group includes polycythemia Vera (PV), essential thrombocythemia (ET), primary myelofibrosis (PMF) and other rare disorders. In the latter group, substitution of phenylalanine for valine at codon 617 (JAK2V617F), could be relevant to the disease. In this study we used modified PCRRFLP to detect JAK2 V617 F mutation in chronic myeloproliferative neoplasms. Materials and MethodsIn this cross sectional study, for detection of JAK2 V617 F mutation, 47 subjects were enrolled and peripheral blood samples were collected between 2015 and 2016. The samples were collected from the clinic center of Arak city and diagnosed to be JAK2 V617F positive by TaqMan probe and sequencing methods. All samples were investigated for the mutation by modified PCRRFLP using specific primers and BsaXI restriction enzyme. The data were analyzed by ttest. ResultsOur modified PCRRFLP for detection of JAK2 V617F mutation showed the same results as TaqMan probe and sequencing standard methods. In this study we have positive and negative samples and a standard method whose sensitivity and specificity was calculated to be 100% . Conclusions Our modified PCRRFLP is a comparable method with gold standard methods, TaqMan probe and sequencing, for detection of JAK2 V617F mutation. The advantages of this modified method include its ability to detect JAK2 V617F in homozygote and heterozygote conditions, and the presence of the internal digestion control.