بهینه سازی بیان، تخلیص و بررسی خاصیت ضد میکروبی پروتیین نوترکیب بتا دیفنسین 2 نوتروفیل‎های گاو

زمینه و هدف: دیفنسین‎ها یکی از بزرگ‎ترین خانواده‎ی پپتید‎های ضد میکروب می‎باشند که به واسطه‎ی فعالیت بر علیه باکتری‎ها، قارچ‎ها و بسیاری از ویروس‎ها به عنوان آنتی‎بیوتیک‎های نسل جدید منفعت بسیاری دارند. هدف از این مطالعه بهینه سازی بیان، تخلیص و بررسی خاصیت ضد میکروبی پروتیین بتا دیفنسین 2 نوتروفیل‎های گاو (bnbd2) بوده است.روش بررسی: در این مطالعه‎ی تجربی-آزمایشگاهی باکتری اشرشیاکلیbl21(de3) حامل وکتور pet-32a(+) که ژن bnbd2 در آن همسانه سازی شده بود جهت مطالعات مورد استفاده قرار گرفت. بیان پروتیین bnbd2 با تغییر در پارامترهای دانسیته‎ی سلولی، دمای رشد، مدت زمان القا با استفاده از سیستم الکتروفورز عمودی (sds-page) و تست برادفورد به صورت کمی و کیفی بررسی گردید. مراحل تخلیص پروتیین نوترکیب با کمک روش شیمیایی شکافت در جایگاه فرمیک اسید و عبور از سانتریکون و اثر ضد باکتری پروتیین تخلیص شده بر چند نمونه‎ی باکتریایی گرم مثبت و گرم منفی مورد بررسی قرار گرفت.یافته ها: با استفاده از محیط کشت luria–bertani، شروع القا در جذب نوری 8/0 در طول موج 600 نانومتر، غلظت یک میلی مولار ماده‎ی القا کننده‎ی iptg، دمای رشد 30 درجه و مدت زمان 4 ساعت پس از القا بیشترین میزان بیان پروتیین به دست آمد. پروتیین نوترکیب با استفاده از شکافت در جایگاه فرمیک اسید و عبور از سانتریکون تخلیص گردید. نتایج آزمایش وسترن بلاتینگ نیز نشان داد که پروتیین نوترکیب به طور اختصاصی به آنتی‎بادی mouse anti-(his)6 peroxidase متصل می‎گردد. تشکیل هاله‎ی عدم رشد در محیط‎های کشت مولر هینتون آگار حاوی کشت سطحی باکتری های مورد آزمایش خاصیت ضد باکتری این پروتیین را نشان داد.نتیجه گیری: با توجه به خاصیت ضد میکروبی پروتیین bnbd2و امکان بیان پروتیین در باکتری e. coli می توان به تولید انبوه این پروتیین نوترکیب اقدام نمود