بهینه سازی بیان، استخراج و تخلیص ناحیه N- ترمینال ژن IpaD شیگلا دیسانتری با استفاده از آنالیز پروتیومیکسی

زمینه و هدف: باکتری شیگلا دیسانتری یکی از عوامل پاتوژن مهم است که علی‌رغم تلاش‌های چندین ساله برای تهیه واکسن علیه آن هنوز مطالعات گسترده پیرامون آن ادامه دارد. محصولات پلاسمید تهاجمی شیگلا (ipa) نقش مهمی در تهاجم باکتری ایفا می‌کنند. پروتیین ipad یکی از اعضای این خانواده است که به عنوان کاندید واکسن شیگلا مطرح می‌باشد. مطالعات متعدد بر روی این پروتیین نشان داده که ناحیه n- ترمینال آن نقش مهمی در فرآیند تهاجمی باکتری دارد. این مطالعه با هدف بهینه سازی بیان n- ترمینال ژن ipad به منظور افزایش تولید پروتیین نو ترکیب انجام شد.روش بررسی: در این مطالعه تجربی-آزمایشگاهی باکتری e. coli bl21(de3) حامل پلاسمید pet-28a که ژن ناحیه n- ترمینال ipad در آن همسانه سازی شده بود جهت مطالعات مورد استفاده قرار گرفت. پس از کشت باکتری، تاثیر سه فاکتور زمان القا، دما و غلظت ماده القا کننده ایزو-پروپیل-تایوبتا دی گالاکتوپیرانوزید (iptg) بر میزان بیان، با استفاده از ژل سدیم دو دسیل سولفات-پلی آکریل آمید (sds-page) به صورت کیفی بررسی گردید. با استفاده از تصاویر دو بعدی تهیه شده از ژل‌ها با کمک نرم افزار آنالیز ژل‌های دو بعدی بررسی کمی بیان پروتیین صورت پذیرفت. مراحل استخراج و تخلیص پروتیین نوترکیب با کمک روش شیب اوره آغاز و با عبور نمونه‌ها از ستون کروماتوگرافی پایان یافت.یافته‌ها: نتایج بر روی ژل‌های sds-page نشان داد که میزان تقریبا مشابهی از تولید پروتیین نوترکیب در زمان‌ القا، دما و غلظت های مختلف iptg بیان وجود دارد، اما یافته های نرم افزاری نشان داد بهترین شرایط بیان ناحیه n- ترمینال پروتیین ipad در وکتور pet-28a دمای 37 درجه سانتی‌گراد، غلظت 7/0 میلی مولار iptg و زمان 3 ساعت بعد از القا می‌باشد.نتیجه‌گیری: بر اساس نتایج این مطالعـــه هر پروتیین بعد از فرآیند همسانه سازی شرایط بیان مخصوص به خود را دارا می‌باشد که شرایط دمایی و طول زمان القا سلول‌ها در مقدار تولید پروتیین موثرتر می‌باشند.