همسانه سازی و بیان ژن ناحیه یک فاکتور کشنده ی (Lethal Factor) باسیلوس آنتراسیس در باکتری Escherichia coli

زمینه و هدف: سیاه زخم (آنتراکس) یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل ایجاد کننده بیماری باکتری باسیلوس آنتراسیس می باشد که آنتی ژن حفاظت کننده (pa) و ناحیه یک فاکتور کشنده (lfd1) ایمونوژن های قوی این باکتری بوده و همواره به عنوان کاندیدای واکسن علیه باسیلوس آنتراسیس در نظر گرفته شده اند. هدف این مطالعه تولید آنتی ژن ناحیه یک فاکتور کشنده(lfd1) در باکتری escherichia coli می باشد.روش بررسی: در این مطالعه تجربی آزمایشگاهی ژن lfd1 از پلاسمید pxo1 شناسایی و با واکنش pcr تکثیر شد. با جایگاه های آنزیمی bamh i و xho iدر وکتور (pgem-t easy) همسانه سازی شد و بعد از جداسازی به وکتور بیانی pet28a(+) زیرهمسانه سازی گردید. این وکتور به باکتری e. coli-bl21 (de3) تراریخت (ترانسفورم) شد. بیان ژن lfd1 تحت القای ایزوپروپیل-b -ِd -i-گالاکتوپیرانوزید (iptg) انجام و پروتیین مورد نظر بیان شد.یافته ها: ژن ناحیه یک فاکتور کشنده (lfd1) کلون شده در وکتور بیانی pet28a(+) به وسیله ی توالی یابی، pcr و هضم به وسیله آنزیم های با اثر محدود تایید گردید. همچنین پروتیین نوترکیب تولید شده به وسیله سدیم دودسیل سولفات پلی آکریل آمید ژل (sds-page) و لکه گذاری وسترن تایید گردید.نتیجه گیری: با توجه به ایمونوژن بودن پروتیین lfd1، پروتیین نوترکیب تولید شده در این تحقیق را می توان به صورت مجزا یا ترکیبی با یاورها و یا انتقال دهنده ها در طراحی واکسن برای بیماری سیاه زخم استفاده نمود.