طراحی و بیان پروتئین نوترکیب از ژن tcpa ویبریوکلرا در وکتور pet32a(+)

ززمینه و هدف: ویﺒﺮیﻮﮐﻠﺮا یﮏ ﺑﺎﮐﺘﺮی ﭘﺎﺗﻮژن ﮔﺮم ﻣﻨﻔﯽ اﺳﺖ ﮐﻪ ﻋﺎﻣﻞ ﺑﯿﻤﺎری اﺳﻬﺎل اﺳﺖ. یکی از مهم ترین عوامل بیماری زایی باکتری ویبریوکلرا است؛ پیلی هم تنظیم شونده با توکسین است که برای کلونیزاسیون باکتری در روده لازم است. هدف از این تحقیق بررسی بیوانفورماتیکی و بیان پروتئین نوترکیب tcpa بود.روش بررسی: ژن tcpa به لحاظ وجود کدون های نادر بررسی و بهینه سازی ژن با استفاده از نرم افزارهای بیوانفورماتیکی انجام شد. طراحی پرایمر جهت تکثیر ژن سنتزی tcpa انجام گرفت. ژن سنتزی در وکتور pet32a(+) همسانه سازی شد. پلاسمید نوترکیب pet32a(+)-tcpa در باکتری e.coli سویه bl21(de3) تراریخت شد. بیان ژن tcpa تحت القای iptg 1 میلی مولار انجام گردید. بیان پروتئین نوترکیب با روش sds-page و وسترن بلاتینگ بررسی شد. جهت تخلیص پروتئین نوترکیب از کروماتوگرافی تمایلی ni-nta استفاده شد.یافته ها: ژن طبیعی tcpa دارای شاخص انطباق پذیری 0/6 بود، در حالی که ژن بهینه سازی شده دارای شاخص انطباق پذیری 0/9 بود. با بهینه سازی ژنی درصد کدون های با ترجیح بالا به 75% افزایش یافت. آنالیز آنزیمی همسانه سازی ژن tcpa کلون شده در وکتور pet32a(+) را تایید کرد. پروتئینی با وزن مولکولی 38/6 کیلو دالتون در sds-page دیده شده و واکنش آن با آنتی بادی ضد هیستیدین در وسترن بلات تایید گردید. میزان پروتئین خالص شده 11/533میلی گرم در لیتر بود.نتیجه گیری: بهینه سازی ژنی منجر به بیان بالای پروتئین نوترکیب tcpa شد. با توجه به خاصیت آنتی ژنیسیته tcpa، این پروتئین می تواند کاندیدای مناسبی به منظور توسعه ایمنی علیه وبا باشد.