تشخیص گونه‏های کریپتوسپوریدیوم جدا شده از انسان با روش PCR-RFLP در تهران

هدف: کریپتوسپوریدیوزیس از عفونت‏های انگلی شایع در ایران و به‏عنوان عامل ایجاد اسهال در انسان و دام به‏شمار می‏آید. از این رو شناسایی گونه‏های شایع آن در جمعیت‏های انسانی ضروری است. هدف از انجام مطالعه حاضر تعیین گونه‏های کریپتوسپوریدیوم جدا شده از بیماران مراجعه کننده به سه بیمارستان در تهران بر مبنای ژن 18s rrna با استفاده از روش nested pcr-rflp است.مواد و روش‏ها: مطالعه حاضر از نوع توصیفی- مقطعی بوده و در مرحله اول جمعاً 1128 نمونه مدفوع انسانی از بیماران مراجعه کننده به سه بیمارستان علی اصغر، مفید و امام خمینی در تهران جمع‏آوری شد. سپس نمونه‏ها با روش اسید فاست تغییر یافت و رنگ‏آمیزی و تشخیص داده شد. در مرحله دوم dna نمونه‏های مثبت استخراج و ژنs rrna 18 با روش nested-pcr تکثیر، سپس برای تشخیص گونه، محصول pcr با آنزیم محدود کننده vsp1 برش داده شد در نهایت محصول pcr تعیین ترداف شد. نتایج: از نمونه‏های رنگ‏آمیزی شده با ذیل نلسون تعداد 12 نمونه (06/1 درصد) مثبت تشخیص داده شد. همه این نمونه‏ها با روش nested-pcr تایید شد. قطعه تکثیر یافته 845 جفت‏بازی ژن 18s rrna با آنزیم vsp1 برش داده شد. پس از برش آنزیمی روی ژل آگارز 5/2 درصد، 10 نمونه به‏عنوان کریپتوسپوریدیوم پاروم و بر مبنای الگوی برش آنزیمی و ترادف بازی یک نمونه به‏عنوان کریپتوسپوریدیوم آندرسونی و یک نمونه به‏عنوان کریپتوسپوریدیوم هومنیس تشخیص داده شد.نتیجه‏گیری: گرچه گونه پاروم به‏عنوان گونه شایع در انسان‏ها شناخته شده است ولی ممکن است افراد به گونه هومنیس و آندرسونی نیز مبتلا شوند.