|
|
|
|
ترانسفکشن سلولهای کبدی بهوسیله Dna کلون شده ویروس هپاتیت B و ارزیابی میزان رونویسی و بیان نشانگرهای اختصاصی ویروسی و ژنهای القا کننده اینترفرون
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
میرشهابی حسام ,کریمی محسن ,بهزادیان فریدا ,صباحی فرزانه
|
|
منبع
|
پژوهش هاي آسيب شناسي زيستي - 1392 - دوره : 16 - شماره : 3 - صفحه:65 -79
|
|
|
|
|
چکیده
|
هدف: با وجود اینکه واکسن موثری علیه ویروس هپاتیت b وجود دارد، شیوع جهانی عفونت با این ویروس کاهش چشمگیری پیدا نکرده است. ویروس هپاتیت b برخلاف بسیاری از ویروسهای بیماریزا در انسان قابلیت کشت در آزمایشگاه را ندارد؛ اما ترانسفکشن سلولهای کبدی با منشا انسانی بهوسیله پلاسمید کد کننده ژنوم کامل ویروس هپاتیت b میتواند منجر به تولید ویروس عفونی شود. در صورت راهاندازی و بهینهسازی کشت سلولی، تکثیر ژنوم ویروس در این سلولها را میتوان با استفاده از pcr تشخیص داد، همچنین ترشح آنتیژن سطحی ویروس بهوسیله الایزا قابل اندازهگیری است. ژنهای القا کننده اینترفرون در پاسخ به درمان ویروس هپاتیت b با داروی اینترفرون آلفا بیان میشود، در نتیجه اندازهگیری این ژنها میتواند در موارد عدم پاسخدهی به این دارو موثر باشد. در نتیجه در مطالعات دارویی علاوه بر تشخیص اثر ماده مورد نظر بر شاخصهای ویروسی، با سنجش ژنهای القا کننده اینترفرون میتوان اثر دارو را نیز در فعالسازی ایمنی ذاتی علیه ویروس هپاتیت b بررسی کرد.مواد و روشها: در این مطالعه ترانسفکشن سلولهای کبدی huh-7 بهوسیله پلاسمید pch-9/3091 انجام شد و سپس بیان آنتیژن سطحی هپاتیت b و همچنین تولید mrnaهای ویروسی بررسی شد. علاوه بر این، با استفاده از آغازگرهای ژنهای القا کننده اینترفرون، روش شناسایی آنها راهاندازی و بهینهسازی شد.نتایج: سلولهای huh-7 از تکثیر ویروس هپاتیت b حمایت میکنند. انجام الایزا روی مایع رویی سلولها بیشترین میزان آنتیژن سطحی هپاتیت b را در 72 ساعت پس از ترانسفکشن تایید میکند. با استفاده از آغازگرهایی که برای نواحی s و pg/pc طراحی شده، رونویسی و تکثیر ژنوم ویروس نشان داده شد. نتایج pcr با استفاده از آغازگرهای ژن القا کننده اینترفرون روی سلولهای ترانسفکت شده با پلاسمید ویروسی نشان داد که ممکن است ویروس هپاتیت b در بالا بردن میزان ژنهای القا کننده اینترفرون در سلولهای huh-7 نقشی نداشته باشد.نتیجهگیری: یافتهها نشان داد این سیستم میتواند راه حلی باشد برای مطالعه روی عملکرد ژنوم ویروس، آزمایش داروها و واکسنهای جدید و همچنین بررسی مکانیسمهای مقاومتهای دارویی که در حال حاضر پاسخ به داروهای کنونی از جمله اینترفرون آلفا را با مشکل مواجه نموده است.
|
|
کلیدواژه
|
ویروس هپاتیت B ,ترانسفکشن ,Pcr ,کشت سلولی ,ژنهای القا کننده اینترفرون ,Hepatitis B Virus ,Transfection ,Culture ,Interferon Stimulating Gene
|
|
آدرس
|
دانشگاه تربیت مدرس, گروه ویروسشناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران, ایران, انستیتو پاستور ایران, مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران, ایران, دانشگاه صنعتی مالک اشتر, گروه ژنتیک مولکولی، مرکز تحقیقات علوم و بیوتکنولوژی، دانشگاه مالک اشتر، تهران، ایران, ایران, دانشگاه تربیت مدرس, گروه ویروسشناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران, ایران
|
|
پست الکترونیکی
|
sabahi_f@modares.ac.ir
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Authors
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|