مقایسه بیان شکل تغییر یافته BMP-7 در میزبان‏های پروکاریوتی و یوکاریوتی

هدف: bmp-7 عامل رشد چند منظوره‏ای است که اغلب به دلیل خواص استخوان‏زایی خود شناخته شده است. به دلیل قیمت بالا، دسترسی به این پروتیین برای مصارف درمانی محدود است. تاکنون تولید هترولوگ پروتیین نوترکیب bmp-7 در تعدادی از سیستم‏های بیانی انجام یافته است. در مطالعه حاضر شکل جدیدی از پروتیین در میزبان‏های پروکاریوتی و یوکاریوتی بیان شده است. مواد و روش‏ها: برای بیان در سیستم بیانی پروکاریوتی، پروتیین جدید به فضای پری‏پلاسمی باکتری اشریشیا کلی ترشح شد و تخلیص توسط ستون تمایلی انجام گرفت. برای بیان در سیستم بیانی یوکاریوتی، قطعه cdna با طول کامل به سلول یوکاریوتی cho منتقل شد و کلون‏های پایدار انتخاب شد. بیان پروتیین نوترکیب در هر دو سیستم بیانی توسط آزمون وسترن بلات تایید شد.نتایج: پروتیین نوترکیب جدید به صورت دایمر با وزن مولکولی 36-38 کیلودالتون در سلول یوکاریوتی و به صورت مونومر با وزن مولکولی 16 کیلودالتون در سیستم بیانی اشریشیا کلی تولید شد. تجزیه و تحلیل کمّی با استفاده از الایزا نشان داد که سطح بیان جهش یافته در سیستم بیانی یوکاریوتی و پروکاریوتی به ترتیب 40 و 135 نانوگرم در هر میلی‏لیتر از محیط کشت است.نتیجه‏گیری: در این مطالعه سطح بیان پروتیین در اشریشیا کلی حداقل 3 برابر میزان بیان در سلول یوکاریوتی بود. با این وجود بهینه‏سازی‏های بیشتر برای به‏دست آوردن مولکول دایمر در اشریشیا کلی مورد نیاز است. نتایج مطالعه مذکور نشان داد که بیان پری‏پلاسمی ممکن است برای تولید پروتیین‏های پیچیده مانند bmps مناسب باشد.