تولید پروتیین دوگانه Tir-اینتیمین از باکتری اشریشیا کلی O157:H7 در گیاه توتون (Nicotiana tobbacum) و بررسی ایمنی‏زایی آن در موش آزمایشگاهی

هدف: اشریشیا کلی سویه o157:h7 یکی از مهم‏ترین بیماری‏زاهای تولید کننده بیماری کولیت خونریزی دهنده در انسان است. دام‏های اهلی اصلی‏ترین مخزن این باکتری هستند. پروتیین‏های اینتیمین، tir و espa از مهم‏ترین عوامل بیماری‏زایی این باکتری محسوب می‏شوند. پروتیین espa در ساخت کانال ارتباطی نقش داشته و مانند یک رابط سبب انتقال پروتیین tir به سلول میزبان می‏شود و پروتیین اینتیمین که در غشای باکتری جای گرفته است با متصل شدن به پروتیین tir به غشای میزبان منتقل و منشا اصلی آن نیز باکتری مهاجم است، سبب اتصال محکم و اختصاصی باکتری به سلول میزبان می‏شود. این اتصال باعث ایجاد ضایعه تخریب دیواره سلول میزبان می‏شود. انجام تحقیق بر این اصل است که تولید دو عامل اصلی بیماری‏زایی که باعث اتصال باکتری به میزبان می‏شود به صورت دوگانه و تجویز آن به عنوان یک ایمنی‏زای خوراکی می‏تواند با تحریک مناسب سیستم ایمنی هومورال و به‏ویژه مخاطی میزبان مانع کلونیزاسیون باکتری اشریشیا کلی o157:h7 در مدل حیوانی شود. مواد و روش‏ها: ابتدا به صورت تیوری یک سازه ژنی حاوی قسمت‏هایی از اینتیمین (i) و tir (t) با استفاده از یک رابط جدا کننده پپتیدی به یکدیگر متصل و ژن آن به طور مصنوعی ساخته شد. این ژن مصنوعی براساس کدون‏های گیاه توتون بهینه‏سازی و سپس تحت کنترل پروموتر camv35s در ناقل بیانی گیاه کلون و پس از آن تراریختی و باز‏زایی گیاه توتون با آن انجام گرفت. سپس حیوان مدل با برگ‏های گیاه تراریخت تغذیه شد.نتایج: ایمن‏سازی حیوان با استفاده از بافت گیاه تراریخت حاوی این ایمنی‏زای دو‏گانه موجب تحریک و تولید igg سرمی بر علیه باکتری فوق شد. نتیجه‏گیری: روش تغذیه و ایمن‏سازی با ایمنی‏زاهای خوراکی می‏تواند به عنوان یک ابزار مناسب برای ایجاد ایمنی و احتمالاً محافظت حیوانات در برابر حضور و بیماری‏زایی باکتری اشریشیا کلی o157:h7 عمل نماید.