تولید روتاویروس گاوی بازآرایی شده از طریق تکثیر آن با نسبت بالای عفونت‏زایی ویروس به سلول در کشت سلول و تکثیر ژن‏های غیر ساختمانی با روش RT-PCR

هدف: گروه a روتاویروس، مهم‏ترین عامل ویروسی گاستروانتریت و اسهال شدید در نوزادن و کودکان و مسیول حدود 600 تا 870 هزار مرگ در سال است، بنابراین تشخیص و درمان این بیماری از اهمیت ویژه‏ای برخوردار است. بازآرایی ژن‏ها طی پاساژهای متوالی ویروس با نسبت بالای عفونت‏زایی در کشت سلول و همچنین در عفونت‏های مزمن در بیماران با نقص ایمنی تشخیص داده شده است. در این مطالعه روش rt-pcr برای ردیابی، تشخیص و تکثیر ژن‏های روتاویروس استاندارد و بازآرایی شده راه‏اندازی شده است.مواد و روش‏ها: rna روتاویروس از رده سلولی ma-104 آلوده استخراج شد و حضور ژنوم توسط الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید 10 درصد و رنگ‏آمیزی نیترات نقره، مشخص شد. تکثیر توالی کامل ژن‏های کد کننده nsp1, 2, 3، با واکنش rt-pcr، برای روتاویروس استاندارد و بازآرایی شده، با آغازگرهای اختصاصی انجام گرفت.نتایج: بازآرایی در ژن‏های nsp1, 3 با تغییر الگوی مهاجرت این قطعات در ژل، توسط الکتروفورز در ژل پلی آکریل آمید نشان داده شد. طول کامل محصولات ژن‏های کد کننده nsp1, 2, 3 برای روتاویروس استاندارد و بازآرایی شده تکثیر شد و برای تعیین توالی ارسال شد. نتایج، شکل‏گیری قطعات ژنومی بازآرایی شده، طی پاساژ متوالی روتاویروس گاوی سویه rf را نشان داد.نتیجه‏گیری: تکثیر متوالی ویروس با نسبت بالای عفونت‏زایی در کشت سلول و همچنین عفونت‏های مزمن در گروه‏های هدف با نقص ایمنی در تکامل آن نقش دارد و از طرف دیگرروش‏های استفاده شده برای تعیین ویژگی به طور مداوم در حال تحول و تعریف مجدد است. با در نظر گرفتن تحقق موفقیت مطالعات روتاویروس و اهمیت زیاد توسعه واکسن‏های روتاویروسی، مطالعه بیشتر جزییات بازآرایی و جمع‏آوری داده برای فهم بهتر ویژگی‏های آنتی‏ژنیک و مولکولی ویروس لازم است. مطالعه حاضر اهمیت تنوع ژنتیکی را نشان داده و می‏تواند اطلاعات ارزشمندی در زمینه تکثیر، تنوع، زیست‏شناسی و تکامل روتاویروس را فراهم نماید.