جداسازی، تکثیر و غنی‏سازی سلول‏های بنیادی اسپرماتوگونی موش نوزاد در روش هم‏کشتی با سلول‏های سرتولی اتولوگ

هدف: ارایه یک روش ساده برای جداسازی، تکثیر و غنی‏سازی سلول‏های بنیادی اسپرماتوگونی موش نوزادمواد و روش‏ها: سوسپانسیون سلولی حاوی سلول‏های اسپرماتوگونی و سرتولی با استفاده از هضم آنزیمی از بیضه موش نوزاد دو روزه جداسازی شد. سلول‏ها به صورت هم‏کشتی و در محیط کشت dmem/f12 حاوی 10 درصد سرم به مدت دو هفته کشت داده شدند. ماهیت سلول‏های سرتولی و اسپرماتوگونی به ترتیب توسط بیان پروتیین‏های ویمنتین وplzf تایید شد. برای ارزیابی میزان تکثیر سلول‏های بنیادی اسپرماتوگونی تعداد کلونی‏های تشکیل شده و مساحت آن‏ها در طول دو هفته کشت اندازه‏گیری شد. در پایان هفته دوم، بیان ژن‏های اختصاصی سلول‏های اسپرماتوگونی (stra8، piwill2، dazl، mvh) ارزیابی شد.نتایج: نتایج به‏دست آمده نشان داد که سلول‏های اسپرماتوگونی و سرتولی جدا شده نشانگرهای اختصاصی این سلول‏ها را بیان می‏کنند. در طی دوره کشت، بین چهار نقطه زمانی اختلاف معنی‏داری در تعداد و مساحت کلونی‏های سلول‏های بنیادی اسپرماتوگونی دیده شد (05/0p < ). علاوه بر این بیان ژن‏های اختصاصی سلول‏های اسپرماتوگونی بعد از دو هفته کشت، نشان دهنده عدم تمایز این سلول‏ها بود.نتیجه‏گیری: مطالعه حاضر نشان داد که هم‏کشتی سلول‏های اسپرماتوگونی و سلول‏های سرتولی با منبع یکسان محیط رشد مناسب و بهینه‏ای را فراهم می‏کند که بدون اضافه کردن عوامل رشد خارجی و دستکاری‏های شیمیایی می‏توان از آن برای تکثیر سلول‏های بنیادی اسپرماتوگونی استفاده کرد.