طراحی، بیان، تخلیص و ارزیابی عملکرد قطعه آنتی‌بادی تک زنجیره علیه پروتئین Her2

اهداف: هدف مطالعه حاضر، طراحی و بیان قطعه آنتی‌بادی تک زنجیره علیه پروتئین her2 در سلول e. coli bl21 (de3) و بررسی توانایی آن در شناسایی پروتئین her2 بود.مواد و روش‌ها: ژن کدکننده این قطعه آنتی‌بادی به طول تقریبی 746جفت باز در وکتور بیانی pet28a کلون و پروتئین نوترکیب در سویه e. coli bl21 de3 بیان شد. به دنبال تخلیص قطعه آنتی‌بادی به روش کروماتوگرافی تمایلی، از روش‌های وسترن بلاتینگ و الایزا برای بررسی واکنش آنتی‌بادی scfv علیه پروتئین her2 استفاده شد.یافته‌ها: e. coli قادر به بیان قطعه آنتی‌بادی scfv با عملکرد مناسب علیه her2 است، به‌طوری که می‌تواند این پروتئین را در سطح سلول‌های سرطان پستان نیز شناسایی کند.نتیجه‌گیری: می‌توان از این پروتئین در روش‌های تشخیصی آزمایشگاهی برای تشخیص اختصاصی پروتئین her2 استفاده کرد. قابلیت این پروتئین در تشخیص her2 با استفاده از روش‌های ایمونوهیستوشیمی و یا روش‌های تصویربرداری بایستی مورد بررسی قرار گیرد.

Design, Expression, Purification, and Evaluation of Anti-HER2 scFv

Aims: The aim of the present study was to design and express an antiHER2 single chain variable antibody fragment in E. coli BL21 (DE3) and evaluate its efficiency in recognition of HER2 protein.Materials Methods: An approximately 746bp encoding gene fragment was cloned into pET28a and the recombinant protein was expressed in E. coli BL21 (DE3) strain. Following protein purification by affinity chromatography, western blotting and ELISA were used to evaluate the efficiency of antiHER2 scFv against HER2 protein.Findings: E. coli can express the antiHER2 scFv molecule possessing appropriate function and can detect this protein on the surface of breast cancer cells.Conclusion: This antibody fragment can be used in laboratory diagnostic methods for HER2 diagnostic approaches. Potential capability of this protein in immunohistochemical and imaging approaches against HER2 should be considered.