تعیین ژنوتایپ گونه‌‌های آکانتامبا جداسازی‌شده از خاک شهرستان ورامین، ایران

اهداف: خاک یکی از منابع مهم آلودگی انسان به آکانتامبا است. با توجه به افزایش موارد کراتیت آمیبی در سال‌های اخیر در ایران، توجه بیشتری نسبت به بررسی این آمیب در حال حاضر شده است. مطالعه حاضر با هدف جداسازی گونه‌های آکانتامبا با استفاده از روش واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (pcr) و تعیین ژنوتایپ‌های آنها در شهر ورامین انجام شد.مواد و روش‌ها: به‌طور کلی 18 نمونه از 12 پارک شهر ورامین جمع‌آوری شد. نمونه‌ها از فیلترهای نیتروسلولز 0/45میکرونی عبور داده شدند. پس از فیلترکردن نمونه‌ها، آنها روی محیط آگار غیرمغذی 1/5% همراه با باکتری اشریشیا کلی کشته‌شده کشت داده شدند. dna ژنومیک با محلول dngplustm از پلیت‌های مثبت استخراج شد و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی 18s rrna با تکثیر قطعه 500جفت بازی به روش pcr مورد شناسایی قرار گرفت. نمونه‌های مثبت برای تعیین ژنوتایپ، تعیین ترادف شدند.یافته‌ها: از 18 نمونه خاک، 6 ایزوله (33/3%) آکانتامبا، در محیط کشت از نظر مورفولوژی شناسایی شدند که از این تعداد 4 ایزوله (22/2%) با استفاده از پرایمرهای اختصاصی جنس آکانتامبا تایید شدند. ژنوتایپ تمامی نمونه‌ها t4 گزارش شد.نتیجه‌گیری: با توجه به این نتیجه، خاک پارک‌ها احتمال دارد یک عامل خطر برای افراد، مخصوصاً کودکان در این منطقه باشد. از این ‌رو، توجه بیشتری به نکات بهداشت عمومی توصیه می‌شود.

Genotyping of Acanthamoeba Isolated from Soil in Varamin City, Iran

Aims: The soil is one of the important sources of Acanthamoeba human infection. Regarding the increasing number of Acanthamoeba keratitis cases in recent years in Iran, more attention to investigating this amoeba now is made. The present study aimed to identify the genotypes of Acanthamoeba in Varamin City using polymerase chain reaction (PCR) technique.Materials Methods: Totally, 18 samples of soil were collected from 12 parks in Varamin City. The samples were filtered using 0.45 micro;m nitrocellulose membrane filters. Then, they were cultured in nonnutrient agar medium 1.5% enriched with killed cultured bacteria Escherchia coli. Genomic DNA was extracted by DNGplusTM solution and PCR amplification was performed using specific primers to amplify a 500bp 18S rRNA. Sequencing analysis and BLAST search were done for genotype identification of positive samples.Findings: Out of 18 soil samples, 6 isolates (33.3%) were found to be positive for Acanthamoeba in medium by microscopic observation meanwhile 4 isolates (22.2%) were confirmed by Acanthamoeba genusspecific primers. Genotype identification was revealed that all samples belonged to T4 type.Conclusion: Considering this result, the soil of parks is possible be a risk factor for people, particularly children in this area. Therefore, more attention of public health authorities is recommended.